肝星状细胞来源外泌体不同提取方法的比较

发布时间：2020-12-23 03:40

　　目的采用超速离心法（UC）和优化后的排阻超滤组合法提取肝星状细胞（HSC）来源外泌体,比较两种提取方法所得外泌体的纯度、浓度和总蛋白量。方法分别用UC法和优化后的排阻超滤组合法提取HSC来源外泌体。使用透射电镜观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）检测外泌体浓度及大小,二喹啉甲酸（BCA）试剂盒检测外泌体总蛋白浓度,Western blotting法检测外泌体表面标志物肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）、分化抗原9（CD9）的表达。结果两种方法均可得到圆盘形的30～150 nm膜性囊泡。优化后的排阻超滤组合法所得外泌体,在电镜下可见明显的"茶托"形结构,背景较干净,纯度较高。UC法和优化后的排阻超滤组合法所得外泌体浓度分别为2×10⁹、3.6×10¹¹ particles/ml,平均粒径分别为112.6、121.7 nm。优化后的排阻超滤组合法所得外泌体总蛋白浓度及TSG101的表达高于UC法。结论优化后的排阻超滤组合法虽然操作繁琐,成本较高,但提取的HSC来源外泌体浓度、总蛋白浓度和纯度较超速离心法高,可以作为外泌体分离的有效方... 

【文章来源】：临床和实验医学杂志. 2020年07期

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

各组GM130、TSG101和CD9蛋白的表达注

细胞培养上清0.22 μm过滤后,向100 kd超滤管中加入已滤的上清,4 000 g(离心半径6.5 cm)离心10 min后收集液体。凝胶排阻柱经60 ml PBS冲洗进行柱平衡备用。将预处理好的培养上清加入排阻柱中。再将收集管置于排阻柱下方,在排阻柱中添加PBS进行洗脱并收集洗脱液。将收集到的外泌体全部倒入100 kd超滤管,4 000 g(离心半径6.5 cm)离心15 min,至剩余液体在200 μl左右即为浓缩后的外泌体,保存至-80℃。见图1。1.3 外泌体形态观察

透射电镜下观察发现,两种方法所得的外泌体大小均在100 nm左右,具有明显的膜结构,呈圆盘形。与UC法相比,优化后的排阻超滤组合法所得外泌体在电镜下可见明显的“茶托”形结构,纯度较高。见图2。2.2 外泌体粒径及浓度比较


本文编号：2933001