大肠杆菌诱导的重度脓毒症腹膜炎小鼠腹腔大中性粒细胞的形态及功能
发布时间：2020-12-28 23:00
脓毒症（sepsis）是宿主对感染的免疫应答失调所致的危及生命的多器官功能障碍综合征,而脓毒症腹膜炎（septic peritonitis）是脓毒症患者当中发病率较高的一种疾病。一旦发生感染,中性粒细胞是数量最多最先到达感染部位的固有免疫细胞。在对大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）诱导的小鼠脓毒症腹膜炎的研究中,一些核形态特异、体积较大的“大细胞”于小鼠腹腔灌洗细胞中（PLCs）被发现,并且占有一定数量比例。本文围绕此种“大细胞”展开研究,探索其“身份”、功能以及与脓毒症腹膜炎的关系。结果如下:1.E.coli诱导脓毒症腹膜炎模型的建立为了建立细菌感染引起的脓毒症腹膜炎模型,本研究中选用不同剂量的E.coli（低剂量、中剂量和最高剂量）注射到小鼠（每组7只）腹腔中诱导脓毒症腹膜炎,观察其临床症状和记录生存率。模型建立后,利用临床症状评分系统（clinical score）来评估脓毒症腹膜炎的严重程度,临床症状观察指标包括嗜睡、眶周分泌物、竖毛、呼吸窘迫和震颤等,评分≤3分则定义为轻度脓毒症腹膜炎,评分>3分则定义为重度脓毒症腹膜炎。结果显示:1)低剂量和中...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：160 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
提要
中文摘要
abstract
英文缩写词表
引言
第1章 文献综述
1.1 脓毒症
1.1.1 脓毒症的病因
1.1.2 脓毒症的两个阶段
1.1.3 脓毒症腹膜炎
1.1.4 脓毒症的诊断
1.2 中性粒细胞
1.2.1 生活周期
1.2.2 形态学特征
1.2.3 迁移过程
1.2.4 吞噬
1.2.5 NETs和NETosis
1.2.6 ROS
1.3 中性粒细胞在脓毒症中的作用
1.3.1 中性粒细胞抗感染活性受限
1.3.2 中性粒细胞迁移能力障碍
1.3.3 中性粒细胞胞外陷阱（NETs）对脓毒症的危害
1.3.4 中性粒细胞作为诊断脓毒症的生物学标记物
1.4 中性粒细胞的表型特征
1.4.1 中性粒细胞“老化”表型特征
1.4.2 中性粒细胞在感染中的表型变化
1.4.3 中性粒细胞在肿瘤中的表型变化
1.4.4 中性粒细胞抗原提呈表型特征
第2章 材料方法
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 细菌
2.1.2 实验动物
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验仪器和耗材
2.2 实验方法
2.2.1 E.coli菌种的制备以及脓毒症腹膜炎模型的建立
2.2.2 模型鼠PLCs的制备
2.2.3 HE染色和计数
2.2.4 肌肉注射和肌组织细胞的获取
2.2.5 透射电镜样品的制备
2.2.6 中性粒细胞的分离和纯化
2.2.7 骨髓中性粒细胞体外诱导实验
2.2.8 骨髓中性粒细胞体内诱导实验
2.2.9 细菌在细胞内存活实验
2.2.10 淀粉、巯基乙酸钠、CpG ODN诱导的无菌性腹膜炎模型的建立
2.2.11 流感病毒模型的建立以及肺泡灌洗细胞的提取
2.2.12 金黄色葡萄球菌的制备及其感染模型的建立
2.2.13 细胞因子mRNA水平的检测
2.2.14 流式细胞术检测
2.2.15 免疫荧光实验
2.2.16 统计学分析
第3章 结果
3.1 “大细胞”的发现
3.1.1 E.coli诱导的脓毒症腹膜炎小鼠的生存期和临床表现
3.1.2 E.coli诱导的脓毒症腹膜炎小鼠腹腔细菌的入血情况
3.1.3 “大细胞”的数量及形态学特征
3.2 “大细胞”的数量变化
3.2.1 不同剂量E.coli对“大细胞”数量的影响
3.2.2 大剂量E.coli对“大细胞”出现数量的动态变化
3.3 “大细胞”的“身份”鉴定
3.3.1 “大细胞”的分离纯化及形态
3.3.2 “大细胞”表面ly6G表达
3.4 肌肉感染E.COLI对E-NEUS的诱生作用
3.4.1 肌肉组织的消化条件摸索
3.4.2 肌肉感染E.coli后聚集的中性粒细胞数量动态变化
3.4.3 肌肉感染E.coli后诱生e-Neus情况
3.5 E.COLI对小鼠骨髓和人的中性粒细胞诱导形成E-NEUS情况
3.5.1 E.coli对骨髓中性粒细胞诱导形成e-Neus情况
3.5.2 E.coli对人外周血中性粒细胞诱导形成e-Neus情况
3.5.3 E.coli对人HL-60细胞诱导形成e-Neus情况
3.6 不同诱导剂对小鼠体内产生E-NEUS的影响
3.6.1 CpG ODN,淀粉,巯基乙酸钠对e-Neus产生的影响
3.6.2 流感病毒对e-Neus产生的影响
3.6.3 金黄色葡萄球菌对e-Neus产生的影响
3.7 e-Neus的杀菌能力
3.7.1 e-Neus的吞噬情况
3.7.2 e-Neus的活性氧（ROS）生成情况
3.7.3 e-Neus的NETs形成情况
3.7.4 e-Neus内E.coli存活情况
3.8 e-Neus的IL-10和TNF-Α的MRNA和蛋白水平的检测
3.8.1 IL-10和TNF-α的m RNA水平检测
3.8.2 IL-10和TNF-α的蛋白水平检测
3.9 e-Neus的表面分子表达水平分析
3.9.1 e-Neus的“老化”标志CXCR4
3.9.2 e-Neus的共刺激分子CD80和CD40
3.9.3 e-Neus的吞噬受体CD11b
3.10 e-Neus对脓毒症腹膜炎过继治疗的效果评估
第4章 讨论
第5章 结论
创新点
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
附录
本文编号：2944530
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：160 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
提要
中文摘要
abstract
英文缩写词表
引言
第1章 文献综述
1.1 脓毒症
1.1.1 脓毒症的病因
1.1.2 脓毒症的两个阶段
1.1.3 脓毒症腹膜炎
1.1.4 脓毒症的诊断
1.2 中性粒细胞
1.2.1 生活周期
1.2.2 形态学特征
1.2.3 迁移过程
1.2.4 吞噬
1.2.5 NETs和NETosis
1.2.6 ROS
1.3 中性粒细胞在脓毒症中的作用
1.3.1 中性粒细胞抗感染活性受限
1.3.2 中性粒细胞迁移能力障碍
1.3.3 中性粒细胞胞外陷阱（NETs）对脓毒症的危害
1.3.4 中性粒细胞作为诊断脓毒症的生物学标记物
1.4 中性粒细胞的表型特征
1.4.1 中性粒细胞“老化”表型特征
1.4.2 中性粒细胞在感染中的表型变化
1.4.3 中性粒细胞在肿瘤中的表型变化
1.4.4 中性粒细胞抗原提呈表型特征
第2章 材料方法
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 细菌
2.1.2 实验动物
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验仪器和耗材
2.2 实验方法
2.2.1 E.coli菌种的制备以及脓毒症腹膜炎模型的建立
2.2.2 模型鼠PLCs的制备
2.2.3 HE染色和计数
2.2.4 肌肉注射和肌组织细胞的获取
2.2.5 透射电镜样品的制备
2.2.6 中性粒细胞的分离和纯化
2.2.7 骨髓中性粒细胞体外诱导实验
2.2.8 骨髓中性粒细胞体内诱导实验
2.2.9 细菌在细胞内存活实验
2.2.10 淀粉、巯基乙酸钠、CpG ODN诱导的无菌性腹膜炎模型的建立
2.2.11 流感病毒模型的建立以及肺泡灌洗细胞的提取
2.2.12 金黄色葡萄球菌的制备及其感染模型的建立
2.2.13 细胞因子mRNA水平的检测
2.2.14 流式细胞术检测
2.2.15 免疫荧光实验
2.2.16 统计学分析
第3章 结果
3.1 “大细胞”的发现
3.1.1 E.coli诱导的脓毒症腹膜炎小鼠的生存期和临床表现
3.1.2 E.coli诱导的脓毒症腹膜炎小鼠腹腔细菌的入血情况
3.1.3 “大细胞”的数量及形态学特征
3.2 “大细胞”的数量变化
3.2.1 不同剂量E.coli对“大细胞”数量的影响
3.2.2 大剂量E.coli对“大细胞”出现数量的动态变化
3.3 “大细胞”的“身份”鉴定
3.3.1 “大细胞”的分离纯化及形态
3.3.2 “大细胞”表面ly6G表达
3.4 肌肉感染E.COLI对E-NEUS的诱生作用
3.4.1 肌肉组织的消化条件摸索
3.4.2 肌肉感染E.coli后聚集的中性粒细胞数量动态变化
3.4.3 肌肉感染E.coli后诱生e-Neus情况
3.5 E.COLI对小鼠骨髓和人的中性粒细胞诱导形成E-NEUS情况
3.5.1 E.coli对骨髓中性粒细胞诱导形成e-Neus情况
3.5.2 E.coli对人外周血中性粒细胞诱导形成e-Neus情况
3.5.3 E.coli对人HL-60细胞诱导形成e-Neus情况
3.6 不同诱导剂对小鼠体内产生E-NEUS的影响
3.6.1 CpG ODN,淀粉,巯基乙酸钠对e-Neus产生的影响
3.6.2 流感病毒对e-Neus产生的影响
3.6.3 金黄色葡萄球菌对e-Neus产生的影响
3.7 e-Neus的杀菌能力
3.7.1 e-Neus的吞噬情况
3.7.2 e-Neus的活性氧（ROS）生成情况
3.7.3 e-Neus的NETs形成情况
3.7.4 e-Neus内E.coli存活情况
3.8 e-Neus的IL-10和TNF-Α的MRNA和蛋白水平的检测
3.8.1 IL-10和TNF-α的m RNA水平检测
3.8.2 IL-10和TNF-α的蛋白水平检测
3.9 e-Neus的表面分子表达水平分析
3.9.1 e-Neus的“老化”标志CXCR4
3.9.2 e-Neus的共刺激分子CD80和CD40
3.9.3 e-Neus的吞噬受体CD11b
3.10 e-Neus对脓毒症腹膜炎过继治疗的效果评估
第4章 讨论
第5章 结论
创新点
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
附录
本文编号：2944530
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