全人源埃博拉病毒中和抗体的研究

发布时间：2020-12-29 06:32

　　扎伊尔型埃博拉病毒（Zaire ebolavirus,EBOV）能在人类和非人灵长类（nonhuman primates,NHPs）体内引发急性严重出血热病,具有极强的传染性和致死率。2014年西非爆发的埃博拉疫情推进了相关疫苗和抗病毒药物的快速发展,但截止目前仍没有获批的预防或治疗埃博拉病毒的药物。埃博拉病毒的包膜糖蛋白（glycoprotein,GP）在病毒入侵过程中扮演着关键的角色,是疫苗和抗体研究的重要靶标。实验室前期自主研制的5型腺病毒载体的重组埃博拉疫苗已完成了II期临床试验,在人体中具有良好的安全性,并且可有效地激发免疫反应。由于疫苗需要在感染前使用才能达到保护效果,所以开展暴露后治疗手段的研究很有必要,而单克隆抗体因其良好的特异性和药代动力学特点,是目前免疫治疗的研究热点。本研究的目的是从疫苗临床受试者体内筛选具有埃博拉病毒中和活性的单克隆抗体,并对其结合表位和保护机制进行研究,为埃博拉病毒的暴露后治疗提供有效的手段。首先,基于流式分选和单细胞PCR的抗体筛选平台,从疫苗受试者血样中筛选获得了GP的结合抗体。利用人类免疫缺陷病毒骨架的重组EBOV假病毒对不同受试者的血清... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：114 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

埃博拉病毒的（A）基因组和（B）生命周期[27]

前言RBD 被糖基化、高柔性的 GC 和 MLD 所遮蔽。在次级内体中，GC 和 MLD 被组织蛋白酶从 GP 上切掉，将 RBD 暴露出来，形成激活态的 GP（primed GP，GPcl）[31]。GPcl 的 RBD 通过与内体膜上 NPC1 受体的 C 结构域（NPC1 DomianC，NPC1-C）结合[32]（图 2C），为病毒的膜融合过程提供机会。

第一章__埃博拉病毒包膜糖蛋白特异抗体的筛选然配对的抗体轻重链可变区基因。1.5 线性表达框构建抗体全长基因由于获得的全人源自然配对抗体基因量很大，采用传统构建抗体表达质粒的方法费时费力，不利于高通量的筛选工作。因此构建了如图 1.1 所示的线性抗体基因表达框，通过重叠延伸 PCR 将启动子（PCMV）、前导序列（Ig LH/L）、抗体可变区(VH/L)、抗体恒定区（Ig CH/L）和多聚 A 尾（polyA）连接起来构成抗体全长表达基因。


本文编号：2945189