两种骨髓间充质干细胞分离方法的对比研究

发布时间：2020-12-31 14:56

　　目的比较全骨髓贴壁法和骨组织消化法分离获取骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSCs）的效果。方法分离获取小鼠股骨,冲洗骨髓腔并收集骨髓悬液培养BMMSCs为全骨髓贴壁法;去骨髓的股骨剪碎、消化后培养BMMSCs为骨组织消化法。比较两组BMMSCs的原代细胞数量、细胞生长曲线、细胞传代增殖能力、免疫表型及成骨分化潜能。结果骨组织消化法的BMMSCs原代细胞数量明显多于全骨髓组,并且在第7天细胞就可以融合达到90%;骨组织组的BMMSCs生长快,并且细胞传代增殖能力比全骨髓组强,传代计数实验显示第5次传代后,骨组织组的细胞数量达全骨髓组的4倍（P<0.05）;流式表型鉴定结果显示,两组细胞均高表达干细胞表面标志物Sca-1及表面黏附分子CD29,其中骨组织组Sca-1及CD29阳性细胞的比例均高于全骨髓组;骨组织组BMMSCs几乎不表达CD45和CD11b,而全骨髓组CD45阳性细胞的比例为3.18%,CD11b阳性细胞的比例为9.11%。两组BMMSCs均能分化为成骨细胞。结论骨组织消化法操作简单、成本低,且获得的BMMSC... 

【文章来源】：岭南心血管病杂志. 2020年02期

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

成骨诱导分化结果

分离接种后全骨髓组见大量圆形悬浮细胞，而骨组织组未见悬浮细胞。72 h后可见两组均有大量梭形细胞贴壁，其中全骨髓组细胞散落贴壁，骨组织组细胞呈集落状于骨碎片周围贴壁生长。全骨髓组BMMSCs细胞生长缓慢，培养至第7天可见细胞融合达80%～90%；骨组织组BMMSCs成簇生长，较全骨髓组生长快，培养至第5天可见细胞融合达80%～90%，两组细胞形态一致，均呈长梭形贴壁生长（如图1）。两组原代BMMSCs细胞融合达到80%～90%时分别进行传代。全骨髓组BMMSCs细胞传代前用PBS清洗以除去非贴壁细胞。两组BMMSCs传至第3、第6和第9代时细胞形态如图2所示，可见均为长梭形贴壁细胞。两组BMMSCs细胞中的非贴壁圆形细胞均随纯化代数的增加而降低。取第3代以后的BMMSCs进行细胞流式术和成骨分化实验。

两组原代BMMSCs细胞融合达到80%～90%时分别进行传代。全骨髓组BMMSCs细胞传代前用PBS清洗以除去非贴壁细胞。两组BMMSCs传至第3、第6和第9代时细胞形态如图2所示，可见均为长梭形贴壁细胞。两组BMMSCs细胞中的非贴壁圆形细胞均随纯化代数的增加而降低。取第3代以后的BMMSCs进行细胞流式术和成骨分化实验。2.2骨髓间充质干细胞的生长趋势及增殖能力比较

【参考文献】：
期刊论文
[1]骨髓间充质干细胞治疗炎症性肠病研究进展[J]. 崔国宁,刘喜平.  今日药学. 2019(01)



本文编号：2949816