乙型流感病毒在无血清悬浮培养MDCK细胞上增殖条件的优化

发布时间：2020-12-31 17:08

　　目的优化乙型流感病毒在无血清悬浮培养MDCK细胞上的增殖条件。方法以乙型流感病毒感染无血清悬浮培养的MDCK细胞,对培养条件中的MOI(10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7)、胰酶终浓度（2. 5、5、7. 5、10、15、20μg/mL）、细胞接毒密度（50×10⁴、100×10⁴、300×10⁴、500×10⁴、700×10⁴个/mL）及病毒收获时间（24、48、72、96、120 h）进行优化。同时对流感病毒在贴壁培养及无血清悬浮培养MDCK细胞上的增殖情况进行比较。结果乙型流感病毒在无血清悬浮培养MDCK细胞上最适增殖条件为:MOI为10^-2、胰酶终浓度为10μg/m L、细胞接毒密度为300×10⁴个/mL、病毒收获时间为72 h。流感病毒在... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020年05期

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

不同MOI对流感病毒HA血凝滴度（A）及活细胞密度（B）的影响

随着胰酶终浓度逐渐增高，感染72及96 h时，病毒的HA血凝滴度呈先上升后降低的趋势。胰酶终浓度为10μg/m L时，感染72 h时病毒HA血凝滴度可达最高值（9.99±0.57)log2(HAU/25μL）；胰酶终浓度>10μg/mL时，HA血凝滴度降低，各组间HA血凝滴度差异无统计学意义（F=2.14,P=0.095）。随着胰酶终浓度的升高，活细胞密度降低。见图2。因此确定最适胰酶终浓度为10μg/mL。2.3 不同细胞接毒密度对流感病毒增殖的影响

感染72及96 h，各组间HA血凝滴度差异有统计学意义（F=9.04,P=0.030）。感染72 h时，300×104个/mL组HA血凝滴度达最高值（10.6±0.73)log2(HAU/25μL）；细胞密度过小（50×104个/mL）或过大（700×104个/mL）时，HA血凝滴度均较低；细胞密度为（300～500）×104个/mL时，病毒HA血凝滴度较高，在该区间内，细胞密度越大病毒HA血凝滴度越低。见图3。因此确定300×104个/mL为最适细胞密度。2.4 收获时间对流感病毒增殖的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]流感病毒细胞培养时胰酶添加量的优化分析[J]. 慕毓.  中国城乡企业卫生. 2016(06)
[2]提高H9N2亚型禽流感病毒的拯救效率条件的优化[J]. 贾佳,赵永祥.  生物技术世界. 2016(04)
[3]广谱流感疫苗的研究进展[J]. 谢辛慈,刘璐,袁松华,张晓燕,徐建青.  微生物与感染. 2016(01)
[4]稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2基因的MDCK细胞系的建立[J]. 吕让,王丹,宋彩玲,齐宾宾,刘明.  中国预防兽医学报. 2014(09)



本文编号：2949988