家蝇几丁质酶MDCht9的表达及功能研究

发布时间：2021-01-02 23:27

　　目的:对MDCht9基因进行序列分析,采用原核表达体系获得纯化的重组蛋白,测定其酶学活性及稳定性;分析MDCht9的时空表达特征,RNA干扰法探讨其在家蝇生长发育过程中的功能。方法:1.MDCht9的生物信息学分析:构建系统进化树,用生物信息学软件分析MDCht9基因编码蛋白的理化性质、二级结构和信号肽等,预测蛋白质的功能;2.重组蛋白的表达及酶活的测定:以pET28a（+）为载体,构建pET28a（+）-MDCht9重组质粒,将重组质粒转化到表达感受态细胞中进行诱导表达,表达产物用SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,采用镍柱对表达的蛋白进行纯化,质谱鉴定纯化蛋白。以4MU-（GlcNAc）₃寡聚物为底物,荧光分析法测定重组蛋白酶活性及体外酶活性的稳定性。3.时空表达模式分析:使用Real-time PCR技术和Western-blot技术分别从基因水平和蛋白翻译水平,分析MDCht9在卵、各龄期幼虫、蛹、成虫不同发育时期的表达情况;4.RNA干扰探究MDCht9功能:以重组质粒为模板,体外合成dsRNA,通过显微注射法将dsRNA导入家蝇2龄末期幼虫体内,分别在12 ... 

【文章来源】：贵州医科大学贵州省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

MDCht9基因与三种昆虫几丁质酶邻位连接树

疏水性的分析

跨膜结构结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]棉铃虫Ⅳ型几丁质酶的基因克隆、酶学性质及表达谱[J]. 麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔,马纪,刘宁,王威,李梦鸽,古新蓉,王新,刘小宁.  昆虫学报. 2019(02)
[2]家蝇几丁质酶基因MDCII重组表达质粒的构建及表达模式研究[J]. 杨尉锦,国果,吴沁怡,李妍,付萍,张勇.  生物技术通报. 2017(02)
[3]几丁质酶在农业方面的应用研究概况[J]. 唐梦君,有利利,倪红.  南方农业. 2017(01)
[4]利用RNA干扰技术沉默稻纵卷叶螟几丁质合成酶A基因[J]. 李娇,杜娟,李尚伟.  山地农业生物学报. 2016(03)
[5]几丁质酶的研究进展[J]. 姜竹峪,陈羽,魏锦兴,陈珊,徐威.  沈阳药科大学学报. 2016(05)
[6]昆虫几丁质酶基因家族功能研究进展[J]. 张道伟,钱正敏,张正玲,骆颖.  环境昆虫学报. 2016(01)
[7]一种具有高β-葡聚糖酶活性的几丁质外切酶基因的克隆、表达和性质鉴定（英文）[J]. 霍凤敏,冉超,杨雅麟,胡俊,周志刚.  微生物学报. 2016(05)
[8]几丁质酶的研究进展[J]. 糜艳霞,任慧,张常,刘建红,范晓军.  生命科学研究. 2015(05)
[9]舞毒蛾Ldcht10基因序列的克隆及其功能分析[J]. 刘建红,张常,赵秋勇,范晓军.  应用昆虫学报. 2015(05)
[10]苏云金芽胞杆菌chiA73基因的克隆、表达和酶活性分析[J]. 张圆,周国旺,李海涛,刘荣梅,赵一夔,高继国.  生物技术通报. 2015(08)

硕士论文
[1]家蝇幼虫围食膜蛋白（MdPM-17）的基因克隆鉴定及其特性研究[D]. 罗嫚.贵州医科大学 2017
[2]昆虫几丁质酶的进化分析[D]. 万张勇.河北科技大学 2013
[3]金纹细蛾I型几丁质酶的表达、纯化及酶学活性测定[D]. 仙笑笑.太原理工大学 2013



本文编号：2953851