抗人载脂蛋白6单链抗体的筛

发布时间：2021-01-06 07:57

　　目的:筛选特异性抗人载脂蛋白6单链抗体（anti-hLCN6 scFv）,并进行表达纯化和活性鉴定。方法:采用RT-PCR技术,用抗体可变区简并引物,从hLCN6免疫小鼠的淋巴细胞中扩增全套V_H和V_L基因,装配成scFv基因后将其克隆到噬菌体载体pFAB5C中,构建scFv噬菌体抗体库。对抗体库进行4轮富集,筛选抗hLCN6阳性scFv。经原核表达纯化后,用Western blot和间接ELISA对其活性进行鉴定。结果:筛选到2株亲和力较高的阳性克隆,测序表明其序列一致。获得了高纯度的scFv抗体,其对抗原具有良好的亲和力和特异性。结论:成功筛选到特异性抗hLCN6 scFv,为利用该抗体进行混合斑中的精子分离奠定了基础。 

【文章来源】：中国免疫学杂志. 2020,36(10)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

抗hLCN6 scFv亲和力测定

将全套VH、VL基因扩增产物进行电泳后,扩增出的VH基因片段约为340 bp,VL基因片段约为320 bp,与预期大小一致 (图1A)。将全套VH、VL基因添加酶切位点及连接肽序列后,用重叠延伸PCR将重、轻链可变区拼接成完整的scFv基因,拼接扩增产物经电泳后,得到1条约710 bp的片段,同预期结果相符 (图1B)。将拼接产物双酶切后与载体连接,转化E.coli后铺板,测定库容为1.5×106,随机挑取10个集落,PCR扩增鉴定重组率为90% (图1C)。2.2 噬菌体抗体库的筛选及阳性克隆的鉴定

表1 亲和富集筛选对抗hLCN6 scFv的富集效应Tab.1 Selective enrichment of anti-hLCN6 phage antibodies from phage display library Round Input(cfu) Output(cfu) Recovery rate(output/input) Enrichment[rate(n)/rate(1)] 1 1.0×1013 2.5×105 2.5×10-8 1 2 1.5×1012 2.0×106 1.3×10-6 52 3 2.0×1012 3.8×107 1.9×10-5 760 4 2.4×1012 7.9×107 3.3×10-5 1 3202.3 抗hLCN6 scFv的表达纯化与生物学活性鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠用于混合细胞中精子的分离与法医学鉴定[J]. 陈炯,冯巍,詹飞.  生物工程学报. 2019(01)
[2]单链抗体的构建及其在医学上的应用[J]. 汪希雅,余平.  中国病原生物学杂志. 2009(10)
[3]单链抗体及其在生物医学中的应用[J]. 马颖,邹全明.  免疫学杂志. 2006(S1)
[4]抗p185单抗5E12Fab段基因的克隆及表达[J]. 张国民,陈宇萍,王琰,乔媛媛,安云庆.  中国免疫学杂志. 2005(12)



本文编号：2960214