1-芘丁酸单克隆抗体的制备及免疫学性能鉴定

发布时间：2021-01-14 04:14

　　目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸（PBA）单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法（EDC）制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法批量制备抗体并对其免疫学性能进行鉴定。结果:筛选出能稳定分泌PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株10C2A6,单克隆抗体效价为1∶2.56×10⁵,IC₅₀为0.86 ng/ml,亚型为IgG2b型,亲和常数为1.96×10⁹ L/mol,与芘、1-芘甲醛和1-芘甲醇的交叉反应率分别为1.74%、1.42%和0.63%,与其他物质交叉反应率均小于0.05%。结论:本实验成功制备出了灵敏、特异的PBA单克隆抗体,并为其免疫学检测方法的建立奠定了基础。 

【文章来源】：中国免疫学杂志. 2020,36(09)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

PBA-mAb亲和曲线

表2 免疫小鼠血清灵敏度Tab.2 Serum sensitivity of immunized mice No. PBA concentration (ng/ml) Positive Blank 300 150 75 37 18.75 9.38 4.69 2.34 1 0.41 0.431 0.724 0.749 0.852 1.012 1.001 1.132 1.234 0.025 2 0.168 0.274 0.388 0.542 0.632 0.894 0.951 1.112 1.032 0.015 3 0.064 0.094 0.102 0.148 0.356 0.478 0.632 0.803 0.875 0.023 4 0.014 0.036 0.068 0.132 0.238 0.478 0.532 0.683 1.046 0.004图5 PBA-mAb亚型鉴定

单抗效价采用间接ELISA测定。单抗灵敏度测定:分别配制浓度为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078 125、0 ng/ml的PBA标准品溶液,以间接竞争ELISA测定抗体灵敏度。单抗亚型鉴定按照单克隆抗体亚型试剂盒鉴定步骤进行操作;单抗亲和力测定:根据参考文献[18]把PBA-OVA稀释到1 μg/ml和0.5 μg/ml进行包板,采用间接ELISA法对单克隆抗体亲和力进行测定,计算其亲和力常数Ka值;单抗特异性测定:间接竞争ELISA测定单克隆抗体与PBA的类似物1-芘甲醇、1-芘甲醛、苯并芘、菲、萘、芘以及BSA和OVA之间的交叉反应。2 结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于氮化碳复合材料磁性固相萃取结合高效液相色谱法测定尿液中3种羟基多环芳烃[J]. 念琪循,刘园满,孙冰,王曼曼.  色谱. 2019(03)
[2]卡洛芬单克隆抗体的制备[J]. 熊艳华,高爱中,汪毅.  中国免疫学杂志. 2017(11)

博士论文
[1]玉米赤霉烯酮免疫学快速检测技术研究[D]. 孙亚宁.甘肃农业大学 2017



本文编号：2976194