盘尾丝虫几丁质酶OvCht1的克隆表达与抑制

发布时间：2021-01-17 10:38

　　盘尾丝虫是一种人寄生虫,游走到眼部会导致不同程度的失明,因此盘尾丝虫病也叫河盲症。盘尾丝虫的传播需要中间宿主蚋蚊的参与,当被感染的蚋蚊吸食人血时,3龄的盘尾丝虫幼虫会随之进入人体。目前治疗盘尾丝虫病的主要药物是伊维菌素,能够杀死成虫。该药物原被用于兽用驱虫药,在经过数十年的使用后,近年来也渐渐有出现抗药性的报道。盘尾丝虫几丁质酶OvCht1是高度时期特异性的酶,只在侵染期L3幼虫中表达,与幼虫蜕皮过程有关。因此OvCht1在盘尾丝虫的生活史,尤其是在对宿主的侵染过程中,起着至关重要的作用,可作为新的杀虫靶标。本文通过构建重组表达载体获得OvCht1,筛选实验室化合物库发现抑制OvCht1的化合物,以发现新的抑制剂骨架结构,并对抑制剂的作用机理进行研究。本论文包括以下研究内容:（1）构建大肠杆菌重组表达载体,以获得全长OvCht1。首先对OvCht1序列进行分析,OvCHT编码497个氨基酸,不存在跨膜区域。构建pET22b-OvCht1L-C及pET28a-OvCht1（L-N、S-N、L-C、S-C）表达载体,利用金属螯合层析对目的蛋白进行分离纯化,使用SDS-PAGE观察目的蛋白分... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 线虫
        1.1.1 线虫的分布与分类
        1.1.2 盘尾丝虫
        1.1.3 盘尾丝虫病
    1.2 线虫几丁质酶
        1.2.1 几丁质酶
        1.2.2 线虫几丁质酶
        1.2.3 盘尾丝虫几丁质酶
    1.3 线虫几丁质酶抑制剂
        1.3.1 GH18几丁质酶抑制剂
        1.3.2 线虫几丁质酶抑制剂
        1.3.3 研究线虫几丁质酶抑制剂的意义
    1.4 本论文的选题依据和研究内容
        1.4.1 选题依据
        1.4.2 研究内容
2 盘尾丝虫几丁质酶OvCht1的序列分析与重组表达
    2.1 引言
    2.2 实验材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 盘尾丝虫几丁质酶OvCht1序列分析
        2.2.3 盘尾丝虫几丁质酶OvCht1进化分析
        2.2.4 盘尾丝虫几丁质酶OvCht1重组表达
        2.2.5 OvCht1的定量及纯度分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 盘尾丝虫几丁质酶OvCht1序列分析
        2.3.2 盘尾丝虫几丁质酶OvCht1进化分析
        2.3.3 盘尾丝虫几丁质酶OvCht1重组表达
    2.4 小结
3 盘尾丝虫几丁质酶OvCht1的抑制剂筛选
    3.1 引言
    3.2 实验材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 化合物初筛
        3.2.3 化合物复筛
        3.2.4 Ki值测定
        3.2.5 化合物选择性测定
    3.3 实验结果
        3.3.1 化合物初筛
        3.3.2 化合物复筛
        3.3.3 Ki值测定
        3.3.4 化合物选择性测定
    3.4 小结
4 盘尾丝虫几丁质酶OvCht1抑制剂的抑制机理
    4.1 引言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 同源模建
        4.2.2 化合物2-8衍生物与Ovcht1对接
        4.2.3 化合物2-8与hCht和CeT1对接
    4.3 实验结果
        4.3.1 同源模建
        4.3.2 不同2-8衍生物与Ovcht1结合方式比较
        4.3.3 不同几丁质酶与化合物2-8结合方式比较
    4.4 小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]昆虫几丁质酶的分类、功能分析、重组表达及酶学性质的研究进展[J]. 任慧,张常,范晓军.  农业生物技术学报. 2014(04)
[2]分子对接方法的应用与发展[J]. 段爱霞,陈晶,刘宏德,刘秀辉,卢小泉.  分析科学学报. 2009(04)

硕士论文
[1]亚洲玉米螟几丁质水解酶的克隆表达与生化性质表征[D]. 吴青悦.大连理工大学 2012



本文编号：2982714