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Toll样受体3活化对小鼠脂肪干细胞生物学功能的影响

发布时间:2017-04-12 03:08

  本文关键词:Toll样受体3活化对小鼠脂肪干细胞生物学功能的影响,由笔耕文化传播整理发布。


【摘要】:脂肪间充质干细胞(Adipose-derived stem cells, ASCs)能够自发迁移至组织损伤或炎症部位,通过细胞因子对免疫细胞的调控,发挥免疫调节作用;而且与研究最广泛的骨髓间充质干细胞相比,ASCs具备来源丰富、提取方便等优势。因此,ASCs已经成为组织损伤修复、自身免疫性疾病等疾病治疗的研究热点。而如何进一步提升ASCs的迁移能力、免疫调节能力和其抗炎能力,是干细胞治疗领域的一个重要研究方向。通过聚肌苷酸-聚胞苷酸(Poly(I:C))对ASCs Toll样受体3(TLR3)的激活,本论文构建了一种全新的脂肪干细胞表型(定义为ASC2)。本论文通过研究ASC2集落形成单位、成骨成脂分化能力、细胞表面抗原标志的表达、免疫调节因子的表达以及迁移能力等,检测TLR3的活化对ASCs生物学功能的影响。本论文首先利用酶消化法,从健康小鼠供体的腹部脂肪组织中提取ASCs,通过体外培养扩增、诱导分化、集落形成及细胞表面抗原标志的分析,确定分离出的细胞为ASCs。然后,将TLR3激活剂Poly(I:C)加入ASCs培养液中,诱导出ASC2。通过流式细胞仪测试、Real-time PCR、染色鉴定等多种检测方法,将ASCs和ASC2在表面抗原标志表达、细胞因子的分泌、集落形成单位、成骨成脂分化及迁移能力等方面进行了对比。实验结果显示ASCs与ASC2茜素红、油红O染色结果均呈阳性,染色结果没有明显差距;流式分析结果显示ASCs和ASC2均阳性表达Scal和CD106,阴性表达CD11b、CD45、CD34和CD31; ASCs和ASC2集落形成单位测试没有显著性差异,说明TLR3的活化对ASCs的成骨成脂分化能力、细胞表面标志表达及体外增殖能力没有造成显著性影响。但是,Real-time PCR的结果表明TLR3的活化增强了IL-6、TGF-β、RANTES和VEGF的表达,抑制了KC、MCP-1和Eotaxin-1的表达;趋化性实验则证实了TLR3的活化增强了ASCs的迁移能力。本论文证实了TLR3的活化并没有改变ASCs的干细胞特性,ASC2仍然保持了体外自我更新增殖、分化潜能以及表达特定抗原标志的特性。但是,TLR3的活化改变了ASCs细胞因子的表达和迁移能力,从而改变了其免疫调节作用,提高了其抗炎能力,使得ASC2更好的应用到自身免疫性疾病,比如1型糖尿病等治疗中。
【关键词】:脂肪间充质干细胞 TLR3 抗炎 免疫调节 增殖 分化
【学位授予单位】:大连理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R392
【目录】:
  • 摘要4-5
  • Abstract5-9
  • 引言9-11
  • 1 文献综述11-23
  • 1.1 间充质干细胞11-17
  • 1.1.1 间充质干细胞的定义及研究意义11-12
  • 1.1.2 间充质干细胞的多向分化潜能12-13
  • 1.1.3 间充质干细胞的免疫学特性13-15
  • 1.1.4 间充质干细胞的迁移和归巢能力15
  • 1.1.5 间充质干细胞在自身免疫等疾病中的应用15-17
  • 1.1.6 间充质干细胞应用中存在的问题17
  • 1.2 Toll样受体17-21
  • 1.2.1 Toll样受体生物学性能18
  • 1.2.2 Toll样受体信号通路18-19
  • 1.2.3 Toll样受体免疫学意义19-21
  • 1.3 论文选题依据及研究内容21-23
  • 2 脂肪间充质干细胞的分离、培养与鉴定23-36
  • 2.1 实验材料与方法23-30
  • 2.1.1 实验动物23
  • 2.1.2 实验药品与试剂23-24
  • 2.1.3 实验所需试剂配制24-26
  • 2.1.4 实验仪器与设备26-27
  • 2.1.5 ASCs的分离与原代培养27-28
  • 2.1.6 ASCs的传代培养28
  • 2.1.7 ASCs的冻存与复苏28
  • 2.1.8 ASCs集落形成单位鉴定28-29
  • 2.1.9 流式细胞仪测试ASCs表面标志的表达29
  • 2.1.10 ASCs成骨分化及鉴定29
  • 2.1.11 ASCs成脂分化及鉴定29-30
  • 2.2 实验结果与分析30-34
  • 2.2.1 ASCs集落形成单位鉴定结果30-31
  • 2.2.2 流式细胞仪测试结果31-32
  • 2.2.3 ASCs成骨分化染色结果32-33
  • 2.2.4 ASCs成脂分化染色结果33-34
  • 2.3 本章小结34-36
  • 3 POLY(I:C)对脂肪间充质干细胞的刺激36-44
  • 3.1 实验材料与方法36-37
  • 3.1.1 实验药品与试剂36
  • 3.1.2 实验所需试剂配制36
  • 3.1.3 实验仪器与设备36
  • 3.1.4 POLY(I:C)对ASCs的刺激36
  • 3.1.5 流式细胞仪测试ASCs与ASC2表面标志的表达36-37
  • 3.1.6 集落形成单位检测ASCs与ASC2增殖能力37
  • 3.1.7 ASCs与ASC2成骨分化及鉴定37
  • 3.1.8 ASCs与ASC2成脂分化及鉴定37
  • 3.2 实验结果与讨论37-41
  • 3.2.1 流式细胞仪测试结果37-39
  • 3.2.2 集落形成单位检测结果39-40
  • 3.2.3 POLY(I:C)对ASCs成骨分化的影响40-41
  • 3.2.4 POLY(I:C)对ASCs成脂分化的影响41
  • 3.3 本章小结41-44
  • 4 TLR3活化对脂肪间充质干细胞免疫学性能影响44-53
  • 4.1 实验材料和方法44-45
  • 4.1.1 实验药品与试剂44
  • 4.1.2 实验所需试剂配制44
  • 4.1.3 实验仪器与设备44
  • 4.1.4 Real-time PCR检测ASCs与ASC2分泌细胞因子的能力44-45
  • 4.1.5 ASCs与ASC2体外趋化性实验45
  • 4.1.6 统计学分析45
  • 4.2 实验结果与分析45-51
  • 4.2.1 Real-time PCR检测POLY(I:C)对ASCs分泌细胞因子的影响46-50
  • 4.2.2 体外趋化性实验检测POLY(I:C)对ASCs迁移能力的影响50-51
  • 4.3 本章小结51-53
  • 结论与展望53-55
  • 参考文献55-61
  • 中英文缩略词表61-62
  • 攻读硕士学位期间发表学术论文情况62-63
  • 致谢63-64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Matthew W Klinker;Cheng-Hong Wei;;Mesenchymal stem cells in the treatment of inflammatory and autoimmune diseases in experimental animal models[J];World Journal of Stem Cells;2015年03期


  本文关键词:Toll样受体3活化对小鼠脂肪干细胞生物学功能的影响,由笔耕文化传播整理发布。



本文编号:300579

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