THBS2特异性单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2021-01-30 23:02

　　目的:制备THBS2特异性单克隆抗体并鉴定其特性,为临床应用奠定基础。方法:表达并纯化THBS2不同截断体片段的GST融合蛋白,经小鼠免疫、细胞融合及筛选,制备THBS2特异性单克隆抗体,然后对获得的单抗亲和力和特异性及在不同免疫学实验中的应用进行鉴定,最后采用免疫沉淀法对36例胰腺癌患者及20例正常人血清THBS2进行检测。结果:获得了10株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌抗体;10株单抗经ELISA、Western blot和免疫沉淀证实均能特异性识别人THBS2,且发现THBS2在胰腺癌患者血清中的表达水平显著高于正常人（P<0.000 1）。结论:成功制备获得了亲和力高、特异性好的抗人THBS2单克隆抗体,为血清THBS2的检测奠定了基础。 

【文章来源】：中国免疫学杂志. 2020,36(05)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

GST融合蛋白的重组、表达和纯化

为检测所获单抗与THBS2片段的特异反应,我们分别用GST-1#和GST-2#融合蛋白包被96孔板,然后用抗1#片段及抗2#片段的不同单克隆抗体作为一抗,羊抗鼠酶标抗体作为二抗进行常规ELISA 检测,从图3B和图3C可知,抗1#片段抗体4E11、5A2、9B6、10E5和抗2#片段抗体6H8、7B12、7E2、7F5、 9F7、11A10只特异性地与相应THBS2片段反应,与GST 蛋白均不反应。在Western blot实验中,他们也均可与相应THBS2片段特异结合,与GST 不结合(图3E和图3F)。图3 单克隆抗体与THBS2片段的反应特异性检测

单克隆抗体与THBS2片段的反应特异性检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]多种肿瘤标志物在胰腺癌中的诊断价值及相关性研究[J]. 林文科,吴吉芳,郑志昂.  中国免疫学杂志. 2017(01)
[2]Epidemiology of pancreatic cancer[J]. Milena Ilic,Irena Ilic.  World Journal of Gastroenterology. 2016(44)



本文编号：3009735