阻断TGF-β/TGF-βRⅠ通路对ATDC5细胞增殖、分化及细胞外基质的影响
发布时间：2021-02-02 18:21
目的研究转化生长因子βⅠ型受体（transforming growth factor beta typeⅠreceptor,TGF-βRⅠ）阻断剂SB-505124对软骨细胞增殖、分化及细胞外基质的影响与机制。方法利用Western blot检测不同浓度的SB-505124处理后,前软骨细胞系ATDC5中p-Smad2/3的变化。MTT法检测SB-505124处理对ATDC5细胞生长、增殖的影响及时间、浓度依赖性效应。Western blot检测c-Myc蛋白水平的变化。Real-time PCR检测SB-505124处理后软骨分化、细胞外基质合成及降解相关分子CollagenⅡ、Aggrecan及Adamts5表达与变化,并利用阿尔新蓝染色法检测SB-505124处理对ATDC5细胞中蛋白聚糖合成的影响。结果 Western blot检测结果示:SB-505124处理ATDC5细胞明显抑制TGF-β1激活的p-Smad2/3,并呈浓度依赖性;MTT检测结果示:SB-505124浓度和时间依赖性的抑制ATDC5细胞增殖;Real-time PCR检测结果示:SB-505124处理明显抑...
【文章来源】：第三军医大学学报. 2013,35(10)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
Westernblot检测SB-505124抑制c-Myc蛋白的表达
2．5阿尔新蓝染色检测SB-505124对软骨蛋白聚糖合成的影响对经ITS进行软骨诱导分化7d的ATDC5细胞的Micromass行阿尔新蓝染色，体视学显微镜下观察拍照，与对照组相比，SB-505124处理组明显抑制蛋白聚糖的表达，表现为处理组细胞外基质阿尔新蓝染色明显变浅(图4)。6543210相对基因表达量CollagenⅡAggrecanAdamts5对照组aSB鄄505124处理组aaa:P＜0.01，与对照组比较图3Real-timePCR检测SB-505124对软骨分化和软骨外基质合成及降解标志物的影响ABA:对照组;B:SB-505124处理组图4体视学显微镜下观察阿尔新蓝染色后细胞外基质着色情况(×20)3讨论TGF-β信号通过激活经典与非经典的Smad通路参与了细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生理过程的调节，在胚胎发育、创伤愈合、肿瘤发生、造血及炎症反应等生理病理过程中发挥重要作用［3］。经典的TGF-β/Smad信号通路包括配体、受体及Smad蛋白。哺乳动物中主要存在TGF-β1～3亚型，TGF-β受体属于丝氨酸/苏氨酸激酶受体家族，包括TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、TGF-βRⅢ，其中TGF-βRⅡ具有自身磷酸化功能，直接与TGF-β结合。TGF-βRⅠ又称ALK5，有高度保守的富含甘氨酸及苏氨酸残基的GS区，该GS区被TGF-βRⅡ磷酸化后使TGF-βRⅠ具有激酶活性。参与TGF-β信号通路的Smad蛋白包括通用型Smad4、受体激活型Smad2、Smad3及抑制型Smad7。经典TGF-β/Smad信号通路的激活过程大致为:TGF-βs首先与TGF-βRⅡ结合，TGF-βRⅡ发生二聚化并导致自身磷酸化，磷酸化的TGF-βRⅡ进一步磷酸化TGF-βRⅠ的GS区，导致TGF-βRⅠ受体丝氨酸/苏氨酸激酶激活，从而特异性识别并激活Smad2/3，磷酸化其MH2区SSXS结构，激活后的Smad2/3与受体解离并与细胞质内Smad4结合，形成?
2．5阿尔新蓝染色检测SB-505124对软骨蛋白聚糖合成的影响对经ITS进行软骨诱导分化7d的ATDC5细胞的Micromass行阿尔新蓝染色，体视学显微镜下观察拍照，与对照组相比，SB-505124处理组明显抑制蛋白聚糖的表达，表现为处理组细胞外基质阿尔新蓝染色明显变浅(图4)。6543210相对基因表达量CollagenⅡAggrecanAdamts5对照组aSB鄄505124处理组aaa:P＜0.01，与对照组比较图3Real-timePCR检测SB-505124对软骨分化和软骨外基质合成及降解标志物的影响ABA:对照组;B:SB-505124处理组图4体视学显微镜下观察阿尔新蓝染色后细胞外基质着色情况(×20)3讨论TGF-β信号通过激活经典与非经典的Smad通路参与了细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生理过程的调节，在胚胎发育、创伤愈合、肿瘤发生、造血及炎症反应等生理病理过程中发挥重要作用［3］。经典的TGF-β/Smad信号通路包括配体、受体及Smad蛋白。哺乳动物中主要存在TGF-β1～3亚型，TGF-β受体属于丝氨酸/苏氨酸激酶受体家族，包括TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、TGF-βRⅢ，其中TGF-βRⅡ具有自身磷酸化功能，直接与TGF-β结合。TGF-βRⅠ又称ALK5，有高度保守的富含甘氨酸及苏氨酸残基的GS区，该GS区被TGF-βRⅡ磷酸化后使TGF-βRⅠ具有激酶活性。参与TGF-β信号通路的Smad蛋白包括通用型Smad4、受体激活型Smad2、Smad3及抑制型Smad7。经典TGF-β/Smad信号通路的激活过程大致为:TGF-βs首先与TGF-βRⅡ结合，TGF-βRⅡ发生二聚化并导致自身磷酸化，磷酸化的TGF-βRⅡ进一步磷酸化TGF-βRⅠ的GS区，导致TGF-βRⅠ受体丝氨酸/苏氨酸激酶激活，从而特异性识别并激活Smad2/3，磷酸化其MH2区SSXS结构，激活后的Smad2/3与受体解离并与细胞质内Smad4结合，形成?
【参考文献】：
期刊论文
[1]pEGFP-N1-TGF-β1重组质粒对结肠癌细胞增殖、细胞周期及侵袭性的影响[J]. 于宏,姜政,王丕龙. 第三军医大学学报. 2010(09)
本文编号：3015165
【文章来源】：第三军医大学学报. 2013,35(10)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
Westernblot检测SB-505124抑制c-Myc蛋白的表达
2．5阿尔新蓝染色检测SB-505124对软骨蛋白聚糖合成的影响对经ITS进行软骨诱导分化7d的ATDC5细胞的Micromass行阿尔新蓝染色，体视学显微镜下观察拍照，与对照组相比，SB-505124处理组明显抑制蛋白聚糖的表达，表现为处理组细胞外基质阿尔新蓝染色明显变浅(图4)。6543210相对基因表达量CollagenⅡAggrecanAdamts5对照组aSB鄄505124处理组aaa:P＜0.01，与对照组比较图3Real-timePCR检测SB-505124对软骨分化和软骨外基质合成及降解标志物的影响ABA:对照组;B:SB-505124处理组图4体视学显微镜下观察阿尔新蓝染色后细胞外基质着色情况(×20)3讨论TGF-β信号通过激活经典与非经典的Smad通路参与了细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生理过程的调节，在胚胎发育、创伤愈合、肿瘤发生、造血及炎症反应等生理病理过程中发挥重要作用［3］。经典的TGF-β/Smad信号通路包括配体、受体及Smad蛋白。哺乳动物中主要存在TGF-β1～3亚型，TGF-β受体属于丝氨酸/苏氨酸激酶受体家族，包括TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、TGF-βRⅢ，其中TGF-βRⅡ具有自身磷酸化功能，直接与TGF-β结合。TGF-βRⅠ又称ALK5，有高度保守的富含甘氨酸及苏氨酸残基的GS区，该GS区被TGF-βRⅡ磷酸化后使TGF-βRⅠ具有激酶活性。参与TGF-β信号通路的Smad蛋白包括通用型Smad4、受体激活型Smad2、Smad3及抑制型Smad7。经典TGF-β/Smad信号通路的激活过程大致为:TGF-βs首先与TGF-βRⅡ结合，TGF-βRⅡ发生二聚化并导致自身磷酸化，磷酸化的TGF-βRⅡ进一步磷酸化TGF-βRⅠ的GS区，导致TGF-βRⅠ受体丝氨酸/苏氨酸激酶激活，从而特异性识别并激活Smad2/3，磷酸化其MH2区SSXS结构，激活后的Smad2/3与受体解离并与细胞质内Smad4结合，形成?
2．5阿尔新蓝染色检测SB-505124对软骨蛋白聚糖合成的影响对经ITS进行软骨诱导分化7d的ATDC5细胞的Micromass行阿尔新蓝染色，体视学显微镜下观察拍照，与对照组相比，SB-505124处理组明显抑制蛋白聚糖的表达，表现为处理组细胞外基质阿尔新蓝染色明显变浅(图4)。6543210相对基因表达量CollagenⅡAggrecanAdamts5对照组aSB鄄505124处理组aaa:P＜0.01，与对照组比较图3Real-timePCR检测SB-505124对软骨分化和软骨外基质合成及降解标志物的影响ABA:对照组;B:SB-505124处理组图4体视学显微镜下观察阿尔新蓝染色后细胞外基质着色情况(×20)3讨论TGF-β信号通过激活经典与非经典的Smad通路参与了细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生理过程的调节，在胚胎发育、创伤愈合、肿瘤发生、造血及炎症反应等生理病理过程中发挥重要作用［3］。经典的TGF-β/Smad信号通路包括配体、受体及Smad蛋白。哺乳动物中主要存在TGF-β1～3亚型，TGF-β受体属于丝氨酸/苏氨酸激酶受体家族，包括TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、TGF-βRⅢ，其中TGF-βRⅡ具有自身磷酸化功能，直接与TGF-β结合。TGF-βRⅠ又称ALK5，有高度保守的富含甘氨酸及苏氨酸残基的GS区，该GS区被TGF-βRⅡ磷酸化后使TGF-βRⅠ具有激酶活性。参与TGF-β信号通路的Smad蛋白包括通用型Smad4、受体激活型Smad2、Smad3及抑制型Smad7。经典TGF-β/Smad信号通路的激活过程大致为:TGF-βs首先与TGF-βRⅡ结合，TGF-βRⅡ发生二聚化并导致自身磷酸化，磷酸化的TGF-βRⅡ进一步磷酸化TGF-βRⅠ的GS区，导致TGF-βRⅠ受体丝氨酸/苏氨酸激酶激活，从而特异性识别并激活Smad2/3，磷酸化其MH2区SSXS结构，激活后的Smad2/3与受体解离并与细胞质内Smad4结合，形成?
【参考文献】：
期刊论文
[1]pEGFP-N1-TGF-β1重组质粒对结肠癌细胞增殖、细胞周期及侵袭性的影响[J]. 于宏,姜政,王丕龙. 第三军医大学学报. 2010(09)
本文编号：3015165
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