白念珠菌ERG3基因敲除及其对耐药性的影响

发布时间：2021-02-11 14:35

　　目的·构建白念珠菌ERG3基因敲除株,分析ERG3敲除对白念珠菌唑类药物耐药性的影响及其常见耐药基因的表达。方法·使用融合PCR和同源重组技术,以白念珠菌SN152菌株基因组DNA、带有筛选标记的质粒DNA为模板构建敲除组件。采用醋酸锂转染法将敲除组件转染入SN152中,从而获得ERG3^+/-和ERG3^-/-菌株。采用微量肉汤稀释法来判断SN152、ERG3^+/-和ERG3^-/-菌株对唑类药物的耐药性差异,同时使用实时荧光定量PCR检测菌株中的常见耐药基因。结果·获得白念珠菌ERG3敲除株。ERG3^-/-菌株对唑类药物的耐药性明显高于ERG3^+/-和SN152菌株。ERG3^-/-菌株的常见耐药基因（CDR1、CDR2、MDR1、ERG11）表达显著上升（均P<0.05）。结论·成功构建白念珠菌ERG3敲除株。ERG3基因的敲除提高了白念珠菌唑类药物的耐药性,且该基因表达下调的同时伴随其他耐药基因的表达上调。 

【文章来源】：上海交通大学学报(医学版). 2020,40(02)北大核心

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 对象与方法
    1.1 研究对象、引物及试剂
        1.1.1 菌株和质粒
        1.1.2 引物引物由生工生物工程（上海）有限公司合成，引物序列及合成片段见表2～4。
        1.1.3 试剂
    1.2 实验方法
        1.2.1 白念珠菌基因组抽提
        1.2.2质粒转化与抽提
        1.2.3 构建同源敲除组件
        1.2.4 目的基因ERG3敲除株的构建与鉴定
        1.2.5 药敏试验
        1.2.6 耐药相关基因表达水平检测
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 ERG3基因缺失菌构建成功
    2.2 ERG3基因敲除对白念珠菌唑类药物耐药性的影响
    2.3 ERG3+/-株耐药基因水平的变化
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]融合PCR结合同源重组技术敲除白色假丝酵母菌FLO8基因[J]. 李文静,刘锦燕,史册,王影,赵悦,项明洁.  上海交通大学学报(医学版). 2016(03)
[2]白念珠菌锌簇转录因子编码基因mrr2敲除与鉴定[J]. 王影,吕权真,阎澜,刘锦燕,史册,李文静,项明洁.  诊断学理论与实践. 2015(02)
[3]白念珠菌基因敲除技术的研究进展[J]. 谭宏月,陈丽华,皇幼明,钟彬,顾军,温海.  中国真菌学杂志. 2012(06)
[4]异源性筛选标记对白假丝酵母菌耐受各种应激的影响[J]. 李星星,李德东,阎澜,姜远英.  第二军医大学学报. 2012(09)



本文编号：3029259