EB病毒对MUS81基因表达调控机制的研究

发布时间：2021-02-15 14:55

　　目的:探讨EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）感染对MUS81（methl methanesulfonate and UV sensitive isolate number 81,对乙烷磺酸盐及紫外线敏感的第81号独立序列）表达的影响,研究MUS81基因在EBVaGC发生中的作用和作用机制。方法:（1）采用实时荧光定量PCR技术（Real time quantitative PCR,qRT-PCR）检测EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系中MUS81、EME2（essential meiotic structure-specific endonuclease subunit 2,必需减数分裂结构-特异性内切酶亚基2）及其相关基因在转录水平上的差异;（2）Western blot技术检测两种细胞系中MUS81和EME2蛋白表达的差异;（3）分别构建稳定转染EBV潜伏膜蛋白1（Latent membrane protein1,LMP1）、潜伏膜蛋白2A（Latent membrane protein 2A,LMP2A）、EBV编码小RNA（Epstein-Barr... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
    1.1 仪器、试剂和耗材
        1.1.1 主要仪器
        1.1.2 主要试剂和耗材
        1.1.3 常用液体的配制
    1.2 细胞培养
        1.2.1 实验前准备
        1.2.2 细胞复苏
        1.2.3 培养液更换
        1.2.4 细胞传代
        1.2.5 去甲基化药物处理细胞
    1.3 基因甲基化状态检测
        1.3.1 NA的提取
        1.3.2 NA样本的重亚硫酸盐处理
        1.3.3 甲基化特异性PCR（BGS）
    1.4 MUS81 及相关基因mRNA检测
        1.4.1 RNA的提取
        1.4.2 去g NA处理
        1.4.3 逆转录合成c NA
        1.4.4 实时荧光定量PCR
    1.5 MUS81 及相关基因蛋白检测
        1.5.1 蛋白质的提取
        1.5.2 蛋白质浓度的测定
        1.5.3 Western blot检测目的基因的表达
        1.5.4 免疫组化实验检测MUS81 蛋白表达
    1.6 细胞学实验
        1.6.1 siRNA靶向沉默
        1.6.2 细胞凋亡实验
        1.6.3 细胞周期实验
结果
    2.1 实时荧光定量PCR检测MUS81 及其相关基因的转录表达
    2.2 Western blot检测MUS81和EME2 蛋白表达
    2.3 外源性LMP1、LMP2A和 EBER对 MUS81 表达的影响
    2.4 MUS81启动子区甲基化状态检测结果
    2.5 去甲基化药物处理对 MUS81 基因转录的影响
    2.6 去甲基化药物处理对 MUS81 蛋白表达的变化
    2.7 LMP1 对 MUS81 转录表达的影响
    2.8 MUS81和EME2 基因对细胞周期和细胞凋亡的影响
        2.8.1 检测siMUS81和siEME2 的沉默效率
        2.8.2 MUS81和EME2 表达沉默对SGC7901 细胞系细胞周期和凋亡的影响
    2.9 胃癌组织中MUS81 蛋白的表达
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的学术成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Mus81对人乳腺癌SKBR3增殖、侵袭和迁移的影响[J]. 吴云路,钱颖,吕娟,严秋月,董学君.  医学研究杂志. 2014(10)
[2]EB病毒LMP1在肿瘤研究中的进展[J]. 唐微,朱建思.  现代生物医学进展. 2012(07)



本文编号：3035045