结核分枝杆菌PE/PPE家族蛋白的性质及其在与宿主细胞相互作用中的功能
发布时间：2021-02-17 08:24
结核分枝杆菌感染导致的结核病仍然威胁着全球人类健康。由于多药物耐受和广泛耐药结核分枝杆菌的出现,尤其是HIV共感染,结核病的形势极其严峻。结核分枝杆菌能够通过多种机制逃逸宿主免疫系统是其作为成功病原菌的原因之一。从结核分枝杆菌基因组解密揭示了重要的信息,包括重要的PE/PPE蛋白家族。结核分枝杆菌PE/PPE家族蛋白是由PE和PPE亚家族构成,占结核分枝杆菌编码能力的10%。PE亚家族是根据其N末端保守的P（Pro）-E（Glu）而命名,含有100个成员,具有由110个保守的氨基酸残基编码的N末端结构域,而其C末端序列长度大小不一,并富含GC核苷酸的重复序列PGRS。PE亚家族含有37个pe编码基因和61个pepgrs基因。PPE亚家族是根据其N末端Pro（P）-Pro（P）-Glu（E）序列命名,包含69个成员,根据其C末端结构域特征主要分为三类PPESVP,PPEPPW和PPEMPTR亚家族。这些蛋白特有的序列可能暗示了它们在结核分枝杆菌感染中具有特殊的生理功能。PE/PPE家族蛋白几乎只存在于...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1 结核病
2 堪称“分子魔杖”的结核分枝杆菌PE/PPE家族蛋白
3 PE/PPE蛋白的分类
4 PE/PPE蛋白结构特征
5 PE/PPE家族蛋白的亚细胞定位
6 PE/PPE蛋白的分泌
7 PE/PPE蛋白的表达
7.1 PE/PPE在胞外多种压力条件下的差异表达
7.2 胞内感染条件下差异表达
8 PE/PPE蛋白的调控
8.1 Sigma因子
8.2 拟核相关的全局性转录因子
8.3 双组份调控系统
8.4 其他转录因子
9 PE/PPE蛋白的功能
9.1 参与分枝杆菌能量代谢
9.2 PE/PPE蛋白促进分枝杆菌体外生长
9.3 PE/PPE蛋白促进分枝杆菌在宿主体内存活
9.4 PE/PPE诱导宿主细胞死亡
9.5 PE/PPE蛋白具有纤维蛋白结合功能
9.6 PE/PPE蛋白干扰巨噬细胞功能
9.7 PE/PPE蛋白影响抗原递呈
9.8 C末端结构域是抗原变异的来源
9.9 其他功能
10 PE/PPE蛋白调控宿主免疫反应
10.1 PE/PPE蛋白调控宿主天然免疫反应
10.2 PE/PPE蛋白调控宿主体液反应
11 PE/PPE蛋白作为疫苗靶标和分子诊断标记
11.1 PE/PPE蛋白作为诊断标记
11.2 PE/PPE蛋白作为疫苗靶标
参考文献
第2章 绪论
1 选题依据、研究目的与意义
2 科学问题
3 研究内容与技术路线
4 本文创新点
5 本文不足之处
第3章 结核分枝杆菌PE亚家族蛋白PE11（Rv1169c）的功能研究
1 引言
2 实验材料
2.1 实验质粒、菌株与细胞系
2.2 主要试剂
2.3 主要培养基
2.4 主要溶液
2.5 主要仪器
3 实验方法
3.1 构建表达Rv1169c基因的重组耻垢分枝杆菌
3.2 分析Rv1169c在耻垢分枝杆菌中的表达
3.3 重组耻垢分枝杆菌的亚细胞定位分析
3.4 重组耻垢分枝杆菌脂肪酸测定
3.5 体外分析重组耻垢分枝杆菌在不同压力条件下的生存能力
3.6 重组耻垢分枝杆菌对抗结核药物敏感性分析
3.7 重组耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内存活分析
3.8 重组耻垢分枝杆菌对巨噬细胞活力的影响
3.9 利用荧光定量RT-PCR和ELISA对细胞因子表达的分析
4 实验结果与分析
4.1 Rv1169c成功表达于耻垢分枝杆菌
4.2 Rv1169c蛋白定位于耻垢分枝杆菌细胞壁
4.3 Rv1169c改变耻垢分枝杆菌细胞壁脂肪酸组分
4.4 Rv1169c促使耻垢分枝杆菌对抗生素高度敏感
4.5 Rv1169c减弱重组耻垢分枝杆菌的抗压能力
4.6 Rv1169c增加耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内存活
4.7 Rv1169c促进巨噬细胞的死亡
4.8 Rv1169c选择性调控外周促炎细胞因子IL-6 分泌
5 结果与讨论
6 实验小结
参考文献
第4章 结核分枝杆菌PPE亚家族蛋白Rv1808在宿主信号传递中的作用
1 引言
2 实验材料
2.1 蛋白纯化与复性相关试剂
2.2 Pull-down实验相关
2.3 ELISA相关试剂
2.4 MTT实验相关
3 实验方法
3.1 rRv1808蛋白的表达与纯化
3.2 重组耻垢分枝杆菌构建与鉴定
3.3 重组耻垢分枝杆菌亚细胞结构的分离与鉴定
3.4 Pull-down实验分析
3.5 细胞因子检测
3.6 细胞信号通路分析
Rv1808侵染U937巨噬细胞后的存活率检测"> 3.7 MsRv1808侵染U937巨噬细胞后的存活率检测
3.8 MTT测定巨噬细胞活力
3.9 LDH测定
4 结果与分析
4.1 rRv1808蛋白的表达与纯化
4.2 rRv1808表达于分枝杆菌细胞壁
4.3 rRv1808与TLR2相互作用
4.4 rRv1808蛋白促进细胞因子分泌
4.5 rRv1808特异性促进细胞因子分泌
4.6 rRv1808通过MAPKs和NF-κB信号通路促进TNF-α,IL-6 和IL-10的分泌
4.7 Rv1808促进耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内生存
4.8 MTT证明rRv1808蛋白影响巨噬细胞生存能力
4.9 LDH证明rRv1808不影响细胞裂解
5 讨论
参考文献
附录
致谢
在学期间发表的论文
在学期间参加的课题
【参考文献】：
期刊论文
[1]结核分枝杆菌Rv1168c蛋白的基因表达、纯化及结构分析[J]. 余晓丽,孙战强,周晨俊,温子禄,陈军,孙庆文,王洪海,张舒林. 微生物学报. 2010(07)
本文编号：3037718
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1 结核病
2 堪称“分子魔杖”的结核分枝杆菌PE/PPE家族蛋白
3 PE/PPE蛋白的分类
4 PE/PPE蛋白结构特征
5 PE/PPE家族蛋白的亚细胞定位
6 PE/PPE蛋白的分泌
7 PE/PPE蛋白的表达
7.1 PE/PPE在胞外多种压力条件下的差异表达
7.2 胞内感染条件下差异表达
8 PE/PPE蛋白的调控
8.1 Sigma因子
8.2 拟核相关的全局性转录因子
8.3 双组份调控系统
8.4 其他转录因子
9 PE/PPE蛋白的功能
9.1 参与分枝杆菌能量代谢
9.2 PE/PPE蛋白促进分枝杆菌体外生长
9.3 PE/PPE蛋白促进分枝杆菌在宿主体内存活
9.4 PE/PPE诱导宿主细胞死亡
9.5 PE/PPE蛋白具有纤维蛋白结合功能
9.6 PE/PPE蛋白干扰巨噬细胞功能
9.7 PE/PPE蛋白影响抗原递呈
9.8 C末端结构域是抗原变异的来源
9.9 其他功能
10 PE/PPE蛋白调控宿主免疫反应
10.1 PE/PPE蛋白调控宿主天然免疫反应
10.2 PE/PPE蛋白调控宿主体液反应
11 PE/PPE蛋白作为疫苗靶标和分子诊断标记
11.1 PE/PPE蛋白作为诊断标记
11.2 PE/PPE蛋白作为疫苗靶标
参考文献
第2章 绪论
1 选题依据、研究目的与意义
2 科学问题
3 研究内容与技术路线
4 本文创新点
5 本文不足之处
第3章 结核分枝杆菌PE亚家族蛋白PE11（Rv1169c）的功能研究
1 引言
2 实验材料
2.1 实验质粒、菌株与细胞系
2.2 主要试剂
2.3 主要培养基
2.4 主要溶液
2.5 主要仪器
3 实验方法
3.1 构建表达Rv1169c基因的重组耻垢分枝杆菌
3.2 分析Rv1169c在耻垢分枝杆菌中的表达
3.3 重组耻垢分枝杆菌的亚细胞定位分析
3.4 重组耻垢分枝杆菌脂肪酸测定
3.5 体外分析重组耻垢分枝杆菌在不同压力条件下的生存能力
3.6 重组耻垢分枝杆菌对抗结核药物敏感性分析
3.7 重组耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内存活分析
3.8 重组耻垢分枝杆菌对巨噬细胞活力的影响
3.9 利用荧光定量RT-PCR和ELISA对细胞因子表达的分析
4 实验结果与分析
4.1 Rv1169c成功表达于耻垢分枝杆菌
4.2 Rv1169c蛋白定位于耻垢分枝杆菌细胞壁
4.3 Rv1169c改变耻垢分枝杆菌细胞壁脂肪酸组分
4.4 Rv1169c促使耻垢分枝杆菌对抗生素高度敏感
4.5 Rv1169c减弱重组耻垢分枝杆菌的抗压能力
4.6 Rv1169c增加耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内存活
4.7 Rv1169c促进巨噬细胞的死亡
4.8 Rv1169c选择性调控外周促炎细胞因子IL-6 分泌
5 结果与讨论
6 实验小结
参考文献
第4章 结核分枝杆菌PPE亚家族蛋白Rv1808在宿主信号传递中的作用
1 引言
2 实验材料
2.1 蛋白纯化与复性相关试剂
2.2 Pull-down实验相关
2.3 ELISA相关试剂
2.4 MTT实验相关
3 实验方法
3.1 rRv1808蛋白的表达与纯化
3.2 重组耻垢分枝杆菌构建与鉴定
3.3 重组耻垢分枝杆菌亚细胞结构的分离与鉴定
3.4 Pull-down实验分析
3.5 细胞因子检测
3.6 细胞信号通路分析
Rv1808侵染U937巨噬细胞后的存活率检测"> 3.7 MsRv1808侵染U937巨噬细胞后的存活率检测
3.8 MTT测定巨噬细胞活力
3.9 LDH测定
4 结果与分析
4.1 rRv1808蛋白的表达与纯化
4.2 rRv1808表达于分枝杆菌细胞壁
4.3 rRv1808与TLR2相互作用
4.4 rRv1808蛋白促进细胞因子分泌
4.5 rRv1808特异性促进细胞因子分泌
4.6 rRv1808通过MAPKs和NF-κB信号通路促进TNF-α,IL-6 和IL-10的分泌
4.7 Rv1808促进耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内生存
4.8 MTT证明rRv1808蛋白影响巨噬细胞生存能力
4.9 LDH证明rRv1808不影响细胞裂解
5 讨论
参考文献
附录
致谢
在学期间发表的论文
在学期间参加的课题
【参考文献】：
期刊论文
[1]结核分枝杆菌Rv1168c蛋白的基因表达、纯化及结构分析[J]. 余晓丽,孙战强,周晨俊,温子禄,陈军,孙庆文,王洪海,张舒林. 微生物学报. 2010(07)
本文编号：3037718
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