新基因MXRA7的组织学表达及功能研究

发布时间：2017-04-13 17:20

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【摘要】：目的基质重建相关分子7(MXRA7),是经生物信息学预测存在的基因,已有越来越多的生物信息学资料如高通量数据证实该基因的存在,但目前对其生物学功能还知之甚少。本课题组应用全基因组表达芯片技术,在研究小鼠角膜炎性损伤后新生血管的病理过程中差异表达基因时,捕捉到了MXRA7基因的变化。本研究拟在生物信息学预测分析和前期实验数据的基础上,探究MXRA7基因在小鼠不同组织的表达分布及生物学功能。方法运用现有数据库资源,用生物信息学方法分析MXRA7基因在小鼠不同组织的表达与生物学功能。引进构建MXRA7基因缺陷小鼠,研究正常野生型小鼠与缺陷小鼠之间的生理学差异。应用荧光实时定量PCR技术(RT-q PCR)检测MXRA7基因在不同组织中m RNA的表达水平。根据基因的组织表达分布及可能的预测功能,在MXRA7基因野生型与缺陷型小鼠建立不同的疾病模型:耳洞损伤修复模型,Matrigel新生血管模型及主动脉内皮细胞体外诱导成毛细血管网腔模型。结果成功繁育可稳定遗传的MXRA7基因缺陷小鼠。RT-q PCR检测显示该基因m RNA在小鼠各主要组织或器官中广泛表达,表达水平最高的依次为眼睛、肺、脑,表达最低是骨髓。耳洞损伤修复实验发现,MXRA7基因缺陷鼠耳洞愈合程度明显低于野生型鼠,且在耳洞损伤后第13、26、32天的耳洞面积有差异,差异有统计学意义(p0.05);损伤愈合组织经HE染色后统计分析,两组小鼠的组织横截面积相近或无明显差异;Masson染色分析,缺陷型小鼠耳洞愈合组织结缔组织较野生型致密,愈合组织血管分析显示野生型小鼠微血管密度高于缺陷型。Matrigel胶体内成毛细血管实验显示,野生型组小鼠Matrigel胶体内血管密度、红细胞数量明显高于缺陷鼠组。主动脉内皮细胞体外诱导成毛细血管网腔实验证明,MXRA7野生型小鼠内皮细胞成管能力优于缺陷型。结论实验研究发现MXRA7基因在机体广泛表达,MXRA7基因在损伤修复等胞外基质重建系统中发挥一定的功能,可能是通过影响胞外基质的代谢,成纤维细胞的迁移和新生血管的生成发挥作用。
【关键词】：MXRA7 生物信息学 基因缺陷鼠 损伤修复 新生血管
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R3416
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-10
• 第一章 材料与方法10-18
• 1.1 实验材料10-12
• 1.1.1 实验动物10
• 1.1.2 实验仪器10-11
• 1.1.3 主要实验材料与试剂11-12
• 1.2 实验方法12-18
• 1.2.1 MXRA7基因缺陷鼠鉴定与繁育12-13
• 1.2.1.1 DNA取材12
• 1.2.1.2 PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定12-13
• 1.2.2 RT-qPCR MXRA7基因mRNA在组织器官水平表达分布13-14
• 1.2.2.1 组织或器官RNA提取13-14
• 1.2.2.2 RNA反转录与实时荧光定量反应14
• 1.2.3 耳洞损伤修复模型建立及处理14-16
• 1.2.3.1 耳洞打孔14-15
• 1.2.3.2 耳洞组织固定及HE染色15
• 1.2.3.3 Masson三色染色15-16
• 1.2.4 Matrigel体内新生血管模型16
• 1.2.4.1 模型建立16
• 1.2.4.2 胶体取材拍照16
• 1.2.5 主动脉内皮细胞体外成毛细血管网模型16
• 1.2.5.1 主动脉内皮细胞原代分离培养16
• 1.2.5.2 内皮细胞诱导成毛细血管网16
• 1.2.6 统计学分析16-18
• 第二章 结果18-28
• 2.1 构建MXRA7基因缺陷小鼠基因型鉴定结果18
• 2.2 RT-qPCR检测各组织器官中MXRA7 mRNA的表达18-19
• 2.3 耳洞损伤模型19-24
• 2.4 Matrigel体内成管实验结果24-25
• 2.5 主动脉内皮细胞体外诱导成毛细血管网腔实验25-28
• 讨论28-31
• 结论31-32
• References32-34
• 综述34-46
• 参考文献44-46
• 攻读学位期间的研究成果46-47
• 致谢47-48

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本文编号：304099