约氏疟原虫基因条件修饰体系的构建及其应用分析

发布时间：2021-02-21 10:04

　　目的构建Flp/FRT位点特异重组系统介导的致死型约氏疟原虫基因条件修饰体系,用于疟原虫红前期基因功能的研究。方法构建含有Flp酶基因序列和FRT标记耐药基因的重组质粒,通过Nucleofector电转技术将线性化质粒转染至约氏疟原虫P.yoelii 17XL。经药物筛选并克隆后,利用PCR和核酸探针杂交进行基因型鉴定。经蚊体内发育,启动Flp酶介导的位点特异重组去除药物筛选基因（hDHFR）,并利用PCR技术分析基因工程疟原虫内Flp酶介导的FRT位点间的重组效率。通过检测感染小鼠的发病情况、疟疾血症及生存曲线分析基因工程疟原虫的生物学特性。结果成功构建打靶载体pyUIS4/Flp并重组至UIS4基因的5′调控区,获同源重组疟原虫P.yUIS4/Flp（R）,经蚊体内发育获位点特异重组删除药物筛选基因的基因工程疟原虫P.yUIS4/Flp。PCR和核酸探针鉴定基因工程疟原虫基因型正确。基因工程疟原虫内Flp酶介导的FRT位点间的重组在发育至14d的子孢子内达到近100%的重组效率。与野生型疟原虫比较,小鼠感染后3 d镜下均查见感染红细胞,其内疟原虫形态未见异常,7 d红细胞寄生率达峰... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(06)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 疟原虫虫株、蚊虫及实验动物
        1.2 主要试剂
    2 方法
        2.1 打靶载体的构建
        2.2 基因工程疟原虫的构建
        2.3 基因工程疟原虫的生物特性分析
        2.4 基因工程疟原虫的Flp酶介导的位点特异重组（SSR）效率分析
结 果
    1 打靶载体pyUIS4/flp的构建及鉴定
    2 基因工程疟原虫P.yUIS4/Flp的构建及鉴定
    3 基因工程疟原虫P.yUIS4/Flp的表型分析
    4 基因工程疟原虫P.yUIS4/flp的位点特异重组（SSR）效率分析
讨 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]位点特异性重组技术及其在寄生虫学研究中的应用[J]. 梁佳元,罗恩杰.  中国病原生物学杂志. 2011(04)



本文编号：3044194