miR-219a-5p在创伤性脑损伤模型中通过调控蛋白CCNA2和CACUL1参与神经元细胞凋亡

发布时间：2021-02-21 18:58

　　目的（1）探讨miR-219a-5p在etoposide损伤及H₂O₂损伤细胞模型中的表达情况;（2）利用生物信息学筛选出CCNA2和CACUL1是miR-219a-5p的靶蛋白,并探讨蛋白CCNA2和CACUL1在etoposide损伤及H₂O₂损伤模型中的变化趋势;（3）验证蛋白CCNA2和CACUL1是miR-219a-5p的靶蛋白;（4）探寻特异变化的miR-219a-5p在TBI过程中的作用机制,以期为TBI患者的诊断和治疗提供新思路与新方法。方法（1）采用25μmol/L etoposide刺激损伤神经元细胞,并收集在1h,6h,16h,20h,24h时损伤的神经元细胞及对照组细胞内的总RNA。另外,采用150μmol/L H₂O₂损伤神经元细胞,并提取在6h,12h,18h,24h时损伤的神经元细胞及对照组细胞内的总RNA。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（quantitative Real-time polymerase chain reac... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pMIR-REPORT荧光素酶质粒示意图

17图 2-2 β-半乳糖苷酶表达质粒示意图经元细胞转染过表达或抑制实验研究 miR-219a-5p 与靶基因 CCNA2 和 CACUL1 的关系，我们通过ctamine RNAiMAX 转染 miR-219a-5p agomir 和 antagomir 及其对照司合成）的方法，人为过表达或者降低 miR-219a-5p 在神经细胞内的miR-219a-5p agomir 是根据 miR-219a-5p 成熟体序列设计的双链用于模拟内源性成熟体 miR-219a-5p 序列，从而上调 miR-219a-5p19a-5p antagomir 是根据 miR-219a-5p 成熟体序列设计的一段反义，用于抑制细胞内 miR-219a-5p 的活性。本实验细胞转染步骤如下

实验结果1 原代皮质神经元细胞的鉴定原代皮质神经元经体外培养大约 3 天后，呈纺锤形，部分呈椭圆形或三角形，树突和轴突明显；培养第七天时，胞体遮光性强、立体感好，形态饱满，树突轴突更丰富，相互交织成网络状。为了鉴定皮质神经元的纯度，我们采用 MAP2抗体进行了免疫细胞化学实验。荧光显微镜结果显示呈绿色荧光的部位是神经元细胞质和树突，表示 MAP2 蛋白表达阳性。DAPI 可与双链 DNA 结合，阳性表现为细胞核呈蓝色荧光；计算同一视野下 DAPI 染色阳性的细胞中 MAP2 也呈阳性的神经元所占的百分比，结果显示：MAP2 和 DAPI 双染色均为阳性的神经元所占百分比达 95%以上，说明所培养的原代神经元纯化良好。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体4信号通路研究进展[J]. 蔡炳冈,朱进,汪茂荣.  医学研究生学报. 2015(11)
[2]脂质相关miRNA研究进展[J]. 刘婷,王静,汪俊军.  临床检验杂志. 2014(07)



本文编号：3044777