人CDK9基因真核表达及其与TP53蛋白的相互作用

发布时间：2021-02-22 02:18

　　[目的]构建细胞周期依赖性蛋白激酶9（CDK9）的真核表达载体pEnter-CDK9-His,利用HEK 293T真核表达系统表达CDK9蛋白并验证其与TP53蛋白之间的相互作用。[方法]利用聚合酶链反应从Hela细胞中扩增出CDK9靶基因序列,并将扩增出的CDK9基因片段通过无缝克隆技术克隆至pEnter载体上,经过PCR和一代测序验证插入位置正确且无突变后转染至人胚肾HEK 293T细胞,利用GST-pulldown技术检测本研究所表达的CDK9蛋白与TP53蛋白之间的相互作用。[结果]重组质粒pEnter-CDK9-His的插入基因序列与目的序列完全一致,蛋白免疫印迹检测到融合蛋白表达; GST-pulldown实验证实了CDK9蛋白与TP53蛋白存在直接的相互作用。[结论]成功构建了人CDK9基因的真核表达载体pEnter-CDK9-His,证实了所表达的CDK9融合蛋白与TP53蛋白存在着直接的相互作用,具有一定的生物学功能,为进一步研究CDK9和TP53在肿瘤发生发展以及治疗过程中发挥的功能奠定了基础。 

【文章来源】：生物技术. 2020,30(03)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

CDK9基因PCR扩增产物电泳图

重组质粒p Enter-CDK9的PCR鉴定图

分别将重组质粒p Enter-CDK9-His和空载体pEnter转染HEK 293T真核表达细胞，转染48 h之后收集细胞制作样品利用免疫印迹法检测CDK9的表达。结果可见，转染重组质粒pEnter-CDK9-His的实验组可观察到一相对分子质量与CDK9蛋白相对分子质量理论值42 k Da符合的条带，而pEnter对照组的泳道未观察到特异性条带。图4 CDK9蛋白与TP53蛋白存在直接的相互作用


本文编号：3045288