铜绿假单胞菌PAO1亚精胺脱氢酶SpdH的表达、纯化和初步晶体学研究

发布时间：2021-02-23 10:29

　　铜绿假单胞菌是一种具有很强环境适应性的机会致病菌,感染后通常很难治愈从而造成很严重的后果.聚胺类化学物质在很多种生物体内广泛存在,并且在细胞内发挥多种重要的功能.铜绿假单胞菌PAO1可以利用聚胺类物质作为菌体生长所需的唯一的碳源和氮源,亚精胺脱氢酶（SpdH）在铜绿假单胞菌亚精胺代谢过程中发挥重要的作用.本研究在大肠杆菌中成功表达了可溶性SpdH蛋白,并经过多种方法纯化后筛选获得了蛋白质晶体,通过X射线衍射实验收集到分辨率达到0.185 nm的衍射数据,并使用HKL2000软件对衍射数据进行了处理,这些数据为SpdH结构的解析奠定了基础. 

【文章来源】：南开大学学报(自然科学版). 2020,53(03)北大核心

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【部分图文】：

SpdH蛋白的晶体

去除GST标签后的SpdH使用阴离子交换柱HiTrap Q及凝胶过滤层析柱Superdex200 10/300GL进行纯化,图2为阴离子交换柱的出峰情况,图3为凝胶过滤层析柱的出峰情况,从这两幅图可以看出:目的蛋白出峰单一,带电荷状况和分子量状况都很均一.图4为阴离子交换柱和凝胶过滤层析柱取样SDS-PAGE情况:经过两步纯化之后,SpdH的纯度得到了提升,尤其是凝胶过滤层析之后的样品中杂质蛋白几乎不可见.图1 SpdH亲和层析SDS-PAGE结果

SpdH亲和层析SDS-PAGE结果


本文编号：3047439