LRRK2基因在帕金森病斑马鱼模型的机制研究

发布时间：2021-03-17 16:25

　　帕金森病是世界上第二大神经退行性疾病,其特征是黑质致密部的多巴胺能神经元选择性地的缺失及胞浆内出现嗜酸性的Lewy小体,临床表现为动作缓慢、手脚和身体其他部分震颤、身体僵硬、姿势不稳等运动障碍。随着人类基因组学研究的深入,若干帕金森病的致病基因被发现,其中LRRK2（the leucine-rich repeat kinase 2）较为特殊,因为不管是在家族性的帕金森病,还是在散发型的帕金森病中,LRRK2（the leucine-rich repeat kinase 2）为重要存在的致病基因,使得LRRK2基因成为帕金森病模型的一个重要靶向位点。我们之前利用Morpolino抑制了LRRK2在斑马鱼内的表达,建立了帕金森病模型,模型表现出多巴胺能神经元的缺失和活动减退。但是由于Morpholino抑制效果的暂时性,不能用于大规模药物筛选,我们利用锌指核酶技术（zinc-finger nucleases,ZFNs）在斑马鱼中进行了LRRK2的敲除,但是结果显示突变系表示出了行为活跃。通过RNA-seq,我们发现涉及神经疾病和免疫疾病的基因受到显著的影响。因此,通过抗菌反应实验进行功能性... 

【文章来源】：杭州师范大学浙江省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
1.引言
    1.1 帕金森病概述
        1.1.1 帕金森病的病理学特征
        1.1.2 帕金森病的致病机理
        1.1.3 帕金森病的临床诊断
        1.1.4 帕金森病的治疗方法：
    1.2 LRRK2 基因概述
        1.2.1 LRRK2 基因的结构及表达
        1.2.2 LRRK2 基因的致病机理
        1.2.3 LRRK2 基因和免疫细胞相关
    1.3 斑马鱼生物模式概述
        1.3.1 斑马鱼研究进展
        1.3.2 斑马鱼的人类疾病模型研究
2.实验目的和流程
    2.1 实验目的
    2.2 实验流程图
3.实验材料和方法
    3.1 实验动物的饲养及胚胎收集
        3.1.1 ZFN合成和突变体系产生
        3.1.2 实验动物胚胎收集
    3.2 实验试剂与仪器：
        3.2.1 基因型鉴定试剂和配方
        3.2.2 行为学分析和配方
        3.2.3 尾静脉注射试剂
        3.2.4 激光共聚焦显微镜观察神经元实验试剂和配方
        3.2.5 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 斑马鱼的基因型鉴定
        3.3.2 斑马鱼突变体的行为学分析
        3.3.3 RNA-seq文库的制备和分析
        3.3.4 斑马鱼中的海分枝杆菌（Mm）的尾静脉注射感染
        3.3.5 评估个体感染步骤
4.实验结果
    4.1 基因型鉴定结果
    4.2 LRRK2的WD40 结构域内的编码（氨基酸）移码突变导致斑马鱼的过度活跃
    4.3 RNA测序（RNA-seq）结果分析
    4.4 突变体中的抗菌反应
5.结果与讨论
参考文献
作者简历



本文编号：3087387