胃饥饿素对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后的保护作用及机制

发布时间：2021-03-20 23:55

　　目的探讨胃饥饿素（ghrelin）对HK-2细胞缺氧/复氧的保护作用及机制。方法以HK-2细胞为研究对象,建立缺氧/复氧模型,模拟肾缺血再灌注损伤过程。胃饥饿素预处理后,采用CCK-8试剂盒检测不同质量浓度胃饥饿素（0,12.5,25,50,100,200,400,800,1 600 ng/m L）对缺氧/复氧及正常HK-2细胞活力的影响。将细胞分为正常对照组（N组）,缺氧/复氧损伤组（H/R组）,胃饥饿素（400 ng/m L）预处理组+缺氧/复氧损伤组（ghrelin+H/R组）。造模成功后,采用原位末端转移酶标记（TUNEL）试剂盒检测细胞凋亡,蛋白质印迹法（WB）检测各组细胞外调节蛋白激酶（ERK）及磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、P38促分裂素原活化蛋白激酶（P38）及磷酸化P38促分裂素原活化蛋白激酶（p-P38）的表达。结果缺氧4 h,复氧12 h能有效诱导HK-2细胞缺氧/复氧损伤模型;与胃饥饿素质量浓度为0 ng/m L时相比,质量浓度为12.5,25,50 ng/m L时对缺氧/复氧损伤的HK-2细胞无影响;胃饥饿素质量浓度为100,200,400,800 ... 

【文章来源】：中国药业. 2020,29(15)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

细胞缺氧/复氧损伤模型的建立

CCK-8试验结果表明，采用质量浓度为12.5,25,50 ng/m L的胃饥饿素预处理2 h后，对缺氧/复氧损伤的HK-2细胞无明显影响。但胃饥饿素质量浓度为100,200,400,800 ng/mL预处理能有效提高细胞活力(P<0.01)，且当质量浓度为1 600 ng/mL时，HK-2细胞的活力开始降低，表明胃饥饿素质量浓度为1 600 ng/mL时不利于HK-2细胞的生存。详见图2。为进一步验证胃饥饿素对正常HK-2细胞的影响，将不同质量浓度的胃饥饿素加入正常HK-2细胞中，且置正常培养箱(37℃，5%CO2)孵育16 h。每孔加入新鲜配制的含10μL的毒性检测液CCK-8，将培养板在培养箱孵育3 h，用酶标仪测定450 nm波长处的吸光度，结果见图3。可见，质量浓度为12.5,25,50,100,200,400 ng/mL的胃饥饿素均不影响HK-2细胞的生长，但胃饥饿素质量浓度为800,1 600 ng/mL时，HK-2细胞的活力显著降低(P<0.05)。表明胃饥饿素质量浓度大于800 ng/mL不利于HK-2细胞的生存。

为进一步验证胃饥饿素对正常HK-2细胞的影响，将不同质量浓度的胃饥饿素加入正常HK-2细胞中，且置正常培养箱(37℃，5%CO2)孵育16 h。每孔加入新鲜配制的含10μL的毒性检测液CCK-8，将培养板在培养箱孵育3 h，用酶标仪测定450 nm波长处的吸光度，结果见图3。可见，质量浓度为12.5,25,50,100,200,400 ng/mL的胃饥饿素均不影响HK-2细胞的生长，但胃饥饿素质量浓度为800,1 600 ng/mL时，HK-2细胞的活力显著降低(P<0.05)。表明胃饥饿素质量浓度大于800 ng/mL不利于HK-2细胞的生存。2.3 对缺氧/复氧损伤的HK-2细胞凋亡的影响


本文编号：3091902