hnRNPU蛋白在小鼠睾丸中的表达和功能研究

发布时间：2021-03-29 04:23

　　第一部分hnRNPU蛋白在睾丸中的表达与定位研究【目的】研究hnRNPU蛋白在物种之间的保守性,并探讨其在人和小鼠睾丸中的表达水平以及细胞定位模式。【方法】利用生物信息学分析、免疫荧光、免疫组化、RT-q PCR、Western blot等方法对hnRNPU的氨基酸序列在人、猕猴、牛、狗、大鼠、小鼠等物种中的保守性进行分析,并研究hnRNPU在人和小鼠睾丸中的表达及定位。【结果】hnRNPU蛋白氨基酸序列在人和小鼠中的保守性高达97.25%,hnRNPU蛋白在人和小鼠睾丸中高度表达,且主要在睾丸生殖细胞和支持细胞的细胞核中表达。【结论】hnRNPU在哺乳动物中高度保守,且定位在睾丸生殖细胞和支持细胞的细胞核中。第二部分生殖细胞中hnRNPU对小鼠精子发生和生育能力影响的研究【目的】研究生殖细胞中的hnRNPU对小鼠精子发生和生育能力调控的作用。【方法】利用Cre-Loxp系统构建生殖细胞条件性敲除Hnrnpu基因的小鼠模型,通过生育率测试、睾丸形态学分析等方法以解析hnRNPU在精子发生和雄性生育力中的作用及功能。【结果】成功构建了Stra8-Cre介导的生殖细胞条件性敲除hnRNPU... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

hnRNPU蛋白进化保守性分析和在小鼠不同组织中的表达图

图 2：hnRNPU 在小鼠生殖细胞和支持细胞中的表达及定位图。图 2A：免疫组织化学分析 hnRNPU 蛋白在小鼠睾丸中的表达定位。棕色代表 hnRNPU蛋白的表达，Sc 代表支持细胞，Spc 代表精母细胞，标尺=100μm。图 2B：生殖细胞的标志物 DDX4（绿色）和 hnRNPU（红色）在成年野生型小鼠睾丸中的双重标记荧光实验结果，标尺=100μm。图 2C：支持细胞的标志物 WT1（红色）和 hnRNPU（绿色）在成年野生型小鼠睾丸

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文3.3 hnRNPU 蛋白在人睾丸的生精细胞和支持细胞中同样表达鉴于 hnRNPU 蛋白在进化中高度保守性，并且在人和小鼠中的同源性高达 97.25（图 1A 和 B）。为更加明确 hnRNPU 蛋白对人的睾丸同样具有重要作用，我们在的睾丸组织中对 hnRNPU 蛋白做了进一步表达验证分析。我们收集了因“前列腺癌睾丸切除患者的睾丸组织进行了 Western Blot 实验，实验结果显示 hnRNPU 蛋白在的睾丸中同样表达（图 3A）。另外，我们利用免疫荧光共染技术（利用生殖细胞记物 DDX4、支持细胞标记物 WT1 分别与 hnRNPU 进行共染）对 hnRNPU 蛋白在胎儿期睾丸（24 周）中进行了定位分析，结果显示 hnRNPU 蛋白同样定位在人睾生殖细胞和支持细胞的细胞核中（图 3B 和 C）。这部分结果提示 hnRNP U 蛋白在睾丸中的表达定位模式与在小鼠睾丸中相类似，进一步表明该蛋白可能会参与调控类精子发生。


本文编号：3106891