重组酶介导等温核酸扩增技术检测细粒棘球绦虫方法的建立及初步应用评价

发布时间：2021-04-04 15:17

　　目的建立一种新的敏感、特异且能快速检测细粒棘球绦虫G1的重组酶介导扩增技术（Recombinase aided isothermal amplification, RAA）。方法以细粒棘球绦虫G1（E.granulosus G1,EgG1）线粒体基因序列（GenBank No. AF297617）作为靶序列设计合成引物,以EgG1 DNA为模板进行RAA扩增,反应产物预期大小为284 bp。以聚合酶链式反应（PCR）作为平行对照,应用RAA扩增不同稀释浓度的基因组DNA及梯度稀释的含目的基因片段不同拷贝数的pMD19-T（Simple）克隆质粒,以评价RAA检测方法的检测灵敏度;应用此方法检测多房棘球绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、贾第鞭毛虫、肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA,以评价方法的特异性。方法优化后用于检测感染EgG1的动物组织标本（10份）、模拟现场阳性犬粪标本（3份）以及现场阳性犬粪标本（5份）,以验证该项检测技术的可靠性和实用性。结果建立的RAA法可在40 min内特异性扩增EgG1的目的基因片段,最... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(06)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

模拟阳性犬粪RAA法与PCR检测

犬粪RAA与PCR的盲测检测

将获取的细粒棘球绦虫G1基因组DNA进行RAA以及PCR鉴定。从图1中看出,两种扩增方法均得到与预期大小一致的片段。序列分析表明扩增片段均是目的基因片段。2 不同反应时间的RAA扩增结果

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3118285