新布尼亚病毒非结构蛋白（NSs）纯化及其多克隆抗体制备

发布时间：2021-04-11 19:34

　　目的制备新布尼亚病毒（severe fever thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV）非结构蛋白（NSs）多克隆抗体,进一步发现NSs基因的结构和功能,为深入探究SFTSV的致病机理奠定基础。方法1.PGEX-6P-SFTSV NSs重组蛋白的表达与纯化:以提取的RNA反转录合成的cDNA为模板,扩增SFTSV-NSs片段,分别连接到PGEX-6P-1载体和PFLAG-CMV-3载体上构建重组质粒。构建成功的重组质粒PGEX-6P-SFTSV NSs转化到大肠杆菌DH5α中进行克隆,将鉴定正确的重组质粒转到大肠杆菌BL21中,表达重组蛋白。经过诱导条件优化,选择最适条件,大量诱导重组蛋白,经GST亲和柱层析过滤以获得高纯度的PGEX-6P-SFTSV NSs重组蛋白。2.PGEX-6P-SFTSV NSs多克隆抗体的制备:将纯化后的PGEX-6P-SFTSV NSs重组蛋白与完全佐剂混合,制备抗原,免疫新西兰大白兔,改用不完全佐剂后再免疫四次,得到的抗体经Western Blotting及ELISA检测抗体的特异性及效价。3.多克隆抗体的应用:对感... 

【文章来源】：锦州医科大学辽宁省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SFTSVNSs原核表达PCR产物电泳结果

1 SFTSV NSs 原核表达 PCR 产物电泳结注： 1 和 2 均为 SFTSV NSs 目的片段SV NSs 真核表达基因的扩增结果A 为模板，使用特异性引物 SFTSV-NamHI）进行 PCR 扩增， 产物经 1%琼脂糖可见，在 877bp 左右有一条亮带，与预期 SSV NSs 原核表达基因扩增成功，且条带单

粒构建及测序鉴定XhoI 双酶切原核 PCR 纯化产物和空载体 PGEX-6，用 EcoRI/XhoI 双酶切鉴定。用 EcoRI/BamHI 双体 PFLAG-CMV-3 质粒，回收目的片段并连接，泳显示有和预期大小一致的酶切片段，证明质粒6P- SFTSV NSs 和 SFTSV NSs-Flag。

【参考文献】：
期刊论文
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[2]发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的研究进展[J]. 吴慧,张云智.  中国热带医学. 2017(02)
[3]Current status of severe fever with thrombocytopenia syndrome in China[J]. Jianbo Zhan,Qin Wang,Jing Cheng,Bing Hu,Jing Li,Faxian Zhan,Yi Song,Deyin Guo.  Virologica Sinica. 2017(01)
[4]新布尼亚病毒的流行病学及临床特征[J]. 关文竹,余黎.  微生物学免疫学进展. 2016(04)



本文编号：3131836