流产布鲁氏菌转录调控因子GntR在小鼠模型上诱导的辅助性T细胞免疫应答
发布时间：2021-04-12 01:54
【目的】通过对布鲁氏菌gntR基因进行原核表达,分析其诱导机体产生的Th1和Th2型免疫反应。【方法】以布鲁氏菌S2308基因组为模板,根据GenBank上公布的S2308 gntR基因序列设计引物,利用分子克隆技术,将gntR基因片段克隆至原核表达载体pET-30a,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,诱导GntR蛋白表达;利用SDS-PAGE对GntR重组蛋白（rGntR）进行分析;利用AKTAxpress智能多维纯化系统对rGntR进行纯化;利用Western blotting分析其免疫反应性;用rGntR刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7和小鼠脾细胞,利用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5,以及IgG抗体的水平。将rGntR免疫小鼠,检测小鼠血清中IFN-γ和IL-4的水平。【结果】gntR基因大小为735 bp,编码245个氨基酸,大约在35 kDa处出现蛋白条带,纯化后为单一条带。WB显示,rGntR具有较好的免疫反应性。rGntR可诱导宿主细胞和小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-4和IgG。【结论】rGntR可在体内或体外诱导辅助性T细...
【文章来源】：微生物学报. 2020,60(04)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
rGntR的表达、纯化与Western blotting分析
rGntR刺激RAW 264.7细胞后IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5的水平检测
为了检测rGntR诱导的细胞免疫反应，用rGntR免疫BALB/c小鼠后35 d，无菌分离脾细胞，检测脾细胞中Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4的水平。免疫小鼠的脾细胞用S2308裂解物、Con A(阳性对照)或RPMI 1640(阴性对照)进行刺激。当用热灭活S2308刺激时，免疫rGntR小鼠脾细胞产生IFN-γ和IL-4的水平显著高于免疫PBS的小鼠(P<0.01)(图4)；在所有组中，ConA刺激小鼠脾细胞后，均可产生较高水平的IFN-γ和IL-4；而RPMI 1640刺激的小鼠脾细胞没有细胞因子产生，并且免疫PBS小鼠的脾细胞产生较低水平的细胞因子(图4)，表明小鼠免疫rGntR后，可诱导Th1和Th2型细胞免疫反应。图4.rGntR免疫小鼠后小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-4的水平检测
【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌L7/L12蛋白的基因克隆与原核表达[J]. 胡祥坤,卢天成,王岩,刘思阳,王秀然. 基因组学与应用生物学. 2019(07)
[2]羊种布氏杆菌M5-90 DnaK的原核表达及免疫保护性研究[J]. 张俊波,印双红,易继海,张红,方维焕,王嘉福,李志强,陈创夫. 中国兽医科学. 2018(08)
本文编号：3132377
【文章来源】：微生物学报. 2020,60(04)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
rGntR的表达、纯化与Western blotting分析
rGntR刺激RAW 264.7细胞后IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5的水平检测
为了检测rGntR诱导的细胞免疫反应，用rGntR免疫BALB/c小鼠后35 d，无菌分离脾细胞，检测脾细胞中Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4的水平。免疫小鼠的脾细胞用S2308裂解物、Con A(阳性对照)或RPMI 1640(阴性对照)进行刺激。当用热灭活S2308刺激时，免疫rGntR小鼠脾细胞产生IFN-γ和IL-4的水平显著高于免疫PBS的小鼠(P<0.01)(图4)；在所有组中，ConA刺激小鼠脾细胞后，均可产生较高水平的IFN-γ和IL-4；而RPMI 1640刺激的小鼠脾细胞没有细胞因子产生，并且免疫PBS小鼠的脾细胞产生较低水平的细胞因子(图4)，表明小鼠免疫rGntR后，可诱导Th1和Th2型细胞免疫反应。图4.rGntR免疫小鼠后小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-4的水平检测
【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌L7/L12蛋白的基因克隆与原核表达[J]. 胡祥坤,卢天成,王岩,刘思阳,王秀然. 基因组学与应用生物学. 2019(07)
[2]羊种布氏杆菌M5-90 DnaK的原核表达及免疫保护性研究[J]. 张俊波,印双红,易继海,张红,方维焕,王嘉福,李志强,陈创夫. 中国兽医科学. 2018(08)
本文编号：3132377
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