表达甲型H5N1禽流感病毒结构蛋白的重组痘苗病毒的构建与鉴定

发布时间：2021-04-16 21:34

　　目的构建表达甲型H5N1禽流感病毒（H5N1 avian influenza A virus,H5N1 AIAV）NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒,为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）编码基因,并将改造的HA、NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株（vaccinia virus Tiantan,VTT）于Vero细胞中发生同源重组后,筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒（rVTT-HA/NA）,并对其进行鉴定。结果反转录PCR扩增的HA和NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp,与预期相同。DNA测序证实,改造的HA和NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明,HA和NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示,rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性,血凝滴度为1∶32。结论重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N... 

【文章来源】：国际生物制品学杂志. 2020,43(03)

【文章页数】：5 页

【参考文献】：
期刊论文
[1]四价流感疫苗:应用进展与展望[J]. 黄晨阳,周雨晴,傅晓芳,刘晓晓,陆璇,杨仕贵.  中华临床感染病杂志. 2019(01)
[2]天坛株痘苗毒种创始人齐长庆[J]. 董树林.  微生物学免疫学进展. 2009(03)

硕士论文
[1]八联重组痘苗病毒天坛株的构建及筛选[D]. 王宏宇.吉林农业大学 2014



本文编号：3142215