人柯萨奇病毒B组2型恒河猴感染模型初步研究

发布时间：2021-04-21 07:19

　　人柯萨奇病毒B组2型（CV-B2）作为一个引起的儿童手足口病（HFMD）的病原体之一,流行病学研究证明CV-B2在人群中感染可能会引起重症病例,但相关的致病机理依然处于探索阶段,目前尚无针对CV-B2的有效药物或疫苗,因此建立合适的动物模型对于深入开展基础研究、疫苗研发与药物研究具有重要意义。本论文首先对CV-B2细胞基质及检测方法的建立进行摸索;之后选用与人类较为接近的非人灵长类动物（恒河猴）作为研究对象,构建CV-B2感染的动物模型,对感染模型临床表征、血液生化、排毒情况、组织病理学、细胞生物学及免疫学指标等进行初步研究,探索病毒与宿主之间不同层次的相互作用,为阐明病毒的感染机制、检测方法建立、灵长类动物模型评价等提供理论依据,以期为CV-B2后续开展其感染机制、疫苗研发、标准品构建及动物模型评价等提供数据支持。本研究第一部分建立CV-B2病毒培养体系及检测方法。方法将病毒接种于Vero细胞,按不同时间点收集病毒感染样品,采用微量滴定法测定病毒感染性滴度,绘制病毒感染Vero的增殖动力学曲线;用含有T7启动子的VP1基因与T载体连接后,经体外转录获得RNA标准品。利用标准品建立标准... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 CV-B2病毒培养及检测方法建立
    1. 实验材料
        1.1 病毒
        1.2 细胞系
        1.3 主要实验试剂和耗材
        1.4 引物
        1.5 实验设备仪器
    2. 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 CV-B2病毒的培养、滴度和增殖动力学测定
        2.3 q-RT-PCR标准品的制备及标准曲线的建立
    3. 结果
        3.1 CV-B2在Vero的病变情况
        3.2 CV-B2感染Vero的增殖动力学曲线
        3.3 q-RT-PCR标准品和标准曲线
    4. 讨论
        4.1 CV-B2病毒生长曲线
        4.2 CV-B2核酸检测方法
    5 小结
第二部分 CV-B2恒河猴婴猴感染模型的构建
    1. 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要实验试剂及耗材
        1.3 引物
        1.4 实验设备仪器
    2. 实验方法
        2.1 动物编号
        2.2 动物感染剂量及方式
        2.3 实验观察及体温监测
        2.4 样品采集及处理
        2.5 血细胞及生化检测
        2.6 样品病毒核酸检测
        2.7 病理检查
        2.8 免疫学研究
        2.9 统计学方法
    3. 结果
        3.1 CV-B2感染恒河猴的临床症状
        3.2 CV-B2感染恒河猴的体温监测
        3.3 CV-B2感染恒河猴的血细胞变化
        3.4 CV-B2感染恒河猴的生化指标变化
        3.5 CV-B2感染恒河猴的样品病毒核酸检测
        3.6 CV-B2感染恒河猴的组织病理分析
        3.7 CV-B2感染恒河猴的免疫学指标变化
    4. 讨论
        4.1 临床症状
        4.2 粪便、咽拭子、血液、组织中的病毒载量
        4.3 组织浸染和病理改变
        4.4 免疫反应
    5. 小结
    6. 结论与展望
参考文献
附录
    附录一 主要缩略词表
    附录二 主要溶液的和培养基的配置
    附录三 流式细胞亚群分析
    附录四 组织实验结果统计
研究生简历
研究生在读期间发表论文（含并列第一作者）
致谢



本文编号：3151326