MicroRNA-26b抑制胚胎干细胞的多能性

发布时间：2021-04-28 23:23

　　目的明确miRNA-26b（miR-26b）对小鼠胚胎干细胞（mESCs）多能性的调控作用。方法实时荧光定量PCR检测miR-26簇前体在mESCs和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）中的表达。实时荧光定量PCR检测胚状体（EB）形成过程中成熟miR-26b的表达。CCK-8方法检测miR-26b对mESCs增殖能力的影响。流式细胞术测定miR-26b对mESCs细胞周期与凋亡的影响。使用碱性磷酸酶染色试剂盒检测miR-26b对mESCs中碱性磷酸酶活性的影响。实时荧光定量PCR检测miR-26b对mESCs中多能性转录因子（Oct4、Sox2和Nanog）mRNA表达的影响。使用蛋白质印迹法检测miR-26b对mESCs中3个关键转录因子的蛋白表达影响。用体外模型观察转染pcDNA-pre-miR-26b对mESCs形态的影响。结果 mESCs中,miR-26b的前体在miR-26簇群表达最高。MEF中所有miR-26前体均上调,其中pre-miR-26b上调幅度最大（上调约10倍）。成熟的miR-26b在EB形成过程中从第2天到第6天明显上调,并且成熟miR-26b在MEF中的表达水平明... 

【文章来源】：安徽医科大学学报. 2020,55(07)北大核心

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 药物与试剂
        1.1.2 主要实验仪器
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养和分化
        1.2.2 miRNA过表达
        1.2.3 胚状体(embryoid bodies, EB)的形成及诱导分化
        1.2.4 RNA提取、cDNA合成及实时定量PCR
        1.2.5 增殖和细胞周期分析
        1.2.6 凋亡试验
        1.2.7 碱性磷酸酶染色
        1.2.8 蛋白免疫印迹法
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 mESCs分化过程中miR-26b的内源性表达
    2.2 miR-26b对mESCs增殖的作用
    2.3 miR-26b对mESCs自我更新的作用
    2.4 miR-26b对mESCs分化的作用
3 讨论



本文编号：3166372