牛乳过敏小鼠结肠组织miRNA表达分析及靶基因功能预测

发布时间：2021-05-01 05:04

　　牛乳β-乳球蛋白（β-Lactoglobulin,β-Lg）过敏严重影响婴幼儿的健康成长发育,临床症状主要表现为频繁胃食管反流、呕吐、慢性腹泻、拒食等,是亟需解决的重要食品安全问题。目前,β-Lg过敏炎症的确切发病机理尚不明确。新近研究提示MicroRNA（miRNA）作为肠道黏膜免疫的重要调控因子,在炎性肠病、病原体感染、肠道肿瘤等多种疾病中发挥关键作用,已成为疾病分子调控机制研究的热点。但是,迄今为止鲜见报道剖析miRNA失衡及其靶基因表达在牛乳过敏发生发展中作用。故本研究率先利用Illumina/Solexa高通量测序技术筛选过敏小鼠结肠组织中miRNA的表达谱系,对差异表达miRNA进行靶基因预测筛选、基因功能注释和KEGG信号通路分析。为阐述β-Lg过敏炎症的发病机制提供新的理论依据,为过敏炎症的预治提供新的干预靶点。（1）过敏动物模型的建立和验证5-6周龄雌性KM小鼠随机分为正常组和过敏组（n=20）。牛乳过敏组小鼠每周1次进行腹腔注射0.2 mLβ-Lg（1 mg/mL）,共3周。第4周对小鼠进行β-Lg过敏原口服激发后颈椎脱臼处死。模型构建结束后,对小鼠的过敏体征评分、... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 立题背景
    1.2 牛乳过敏及其引发的相关炎症反应
        1.2.1 牛乳过敏的概述
        1.2.2 牛乳过敏引发的相关炎症反应
    1.3 miRNA的研究概况
        1.3.1 miRNA的发现与命名
        1.3.2 miRNA的生物合成及功能
        1.3.3 miRNA的基本特征及分布
        1.3.4 miRNA的鉴定及检测方法
        1.3.5 miRNA靶基因的预测与鉴定
    1.4 miRNA在肠道及相关炎症疾病中的研究
        1.4.1 miRNA在肠道中的功能研究
        1.4.2 miRNA在相关炎症疾病中的研究
    1.5 本研究的目的意义
    1.6 拟采用的技术路线
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物
        2.1.2 主要试剂和来源
    2.2 仪器与设备
    2.3 主要数据库及生物软件
    2.4 试验方法
        2.4.1 构建β-乳球蛋白过敏动物模型
        2.4.2 β-乳球蛋白致敏模型验证评估
        2.4.3 β-乳球蛋白过敏相关抗体及炎症因子水平变化检测
        2.4.4 miRNA高通量测序
        2.4.5 差异表达miRNA靶基因预测及功能注释
        2.4.6 差异表达miRNA及靶基因qRT-PCR验证
        2.4.7 数据分析
3 结果与分析
    3.1 β-乳球蛋白致敏动物模型构建评估
        3.1.1 β-Lg过敏对小鼠体征指标的影响
        3.1.2 β-Lg过敏对相关炎症抗体及细胞因子的影响
    3.2 Small RNA测序分析
        3.2.1 测序数据质量及长度分布
        3.2.2 已知和新miRNA分析鉴定
        3.2.3 miRNA的特征分析
    3.3 β-乳球蛋白过敏炎症中miRNA差异表达分析
        3.3.1 miRNA差异表达分析
        3.3.2 差异表达miRNA的聚类分析
        3.3.3 差异表达miRNA的qRT-PCR验证
    3.4 差异miRNA靶基因预测及富集分析
        3.4.1 差异miRNA靶基因预测
        3.4.2 靶基因的GO富集性分析
        3.4.3 靶基因的KEGG通路富集分析
        3.4.4 差异miRNA靶基因的qRT-PCR验证
4 讨论
    4.1 β-乳球蛋白过敏差异miRNA筛选及分析
        4.1.1 β-Lg过敏小鼠miRNA表达谱分析
        4.1.2 β-Lg过敏小鼠差异表达miRNA筛选
    4.2 β-Lg过敏差异miRNA验证及在相关疾病中的研究
        4.2.1 β-Lg过敏差异表达miRNA验证
        4.2.2 β-Lg过敏差异表达miRNA在相关疾病中的研究
    4.3 差异表达miRNA靶基因预测及生物信息分析
        4.3.1 差异miRNA靶基因预测及验证
        4.3.2 差异miRNA靶基因的功能预测分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]高通量测序技术分析急性髓系白血病血浆外泌体微RNA表达谱差异[J]. 田淼,谭三勤,刘静茹,王晓华,肖红,葛敏.  中国生物化学与分子生物学报. 2017(02)
[2]miRNA-10a表达与炎症性肠病患者炎性反应的关系及诊断意义研究[J]. 王丽强,林思彤,邵琦,玄延花.  中国实验诊断学. 2015(01)
[3]MAPK信号通路在骨关节炎发病机制中的研究进展[J]. 高世超,殷海波,刘宏潇,眭蕴慧.  中国骨伤. 2014(05)
[4]microRNA在系统性红斑狼疮中的作用及其机制的研究进展[J]. 马倩,李向培.  细胞与分子免疫学杂志. 2014(05)
[5]Th17、Treg细胞与银屑病的关系研究进展[J]. 旷翠娥,陈小红.  皮肤性病诊疗学杂志. 2012(05)
[6]PI3K信号通路及其抑制剂抗恶性肿瘤的研究进展[J]. 陈正军,黄翔.  实用医院临床杂志. 2011(03)

硕士论文
[1]牛乳β-乳球蛋白过敏中Th17/Treg细胞失衡的作用研究[D]. 郑全玲.东北农业大学 2014
[2]黑腹果蝇基因间与基因内microRNA的表达及进化保守性分析[D]. 李亚芳.南京师范大学 2014
[3]银屑病皮损与正常皮肤组织miRNA表达差异分析[D]. 张静.天津医科大学 2011



本文编号：3170167