人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用
本文关键词：人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:人生长激素释放激素(h GHRH)由下丘脑分泌,促进垂体合成和释放人生长激素(h GH)。前原蛋白h GHRH(1-107/8)的成熟由一系列蛋白水解加工步骤,最终的成熟形式是h GHRH(1-44)NH2,h GHRH(1-37)OH和h GHRH(1-40)OH,但其半衰期短和活性低是主要限制。最近研究发现,h GHRH(1-44)分子的N-端1Tyr→Pro-1Pro-或1Pro-延伸或代换,和C端GGC延伸的同源二聚体意外表现出比h GHRH(1-44)NH2更高的生长激素释放活性。本论文主要研究四种新型h GHRH二聚体结构和生物活性之间的关系,为后续进一步动物体内实验研究奠定基础。方法:1 GHRH类似物单体的化学合成和鉴定以固相多肽合成技术合成新型N端和(或)C端改构的GHRH单体肽,其分子量用ESI MS进行鉴定,纯度用C18-反相HPLC进行鉴定。2 GHRH二聚体的形成和鉴定GHRH单体肽在p H=11.5的氨水溶液中,37℃保温60小时后形成二聚体肽,冻干后用肽-PAGE电泳进行纯度鉴定。3 GHRH二聚体肽刺激垂体激素分泌的体外活性分析S-D雌鼠12:12小时明暗交替饲养,饲养温度26±1℃。大鼠经断颈处死,在30分钟内摘取全部脑垂体。用灭菌的lactated Ringer’s buffer(LRB)冲洗后,垂体立即放到内有1 ml LRB的玻璃管中,37℃保温。玻璃管总保温5 h,每1小时后,轻轻吸出试管里面的缓冲液,同时加入1毫升新鲜的缓冲液。从第3小时保温(I3,I4,I5)开始,连续加入1.927μM h GHRH活性多肽。收集的标本用ELISA测定大鼠垂体激素GH、ACTH、LH和PRL。4大鼠垂体生长激素释放抑制分析根据垂体GH释放活性试验(P1,P2,I3,I4,I5),在I3-I5保温中,分别添加0.482或1.927μM的生长激素抑制激素(GHIH)于含有1.927μM GHRH二聚体的管中。无肽P2保温做空白和S肽做标准对照。大鼠垂体GH水平用r GH ELISA试剂盒测定。5 GHRH二聚体肽体外受体结合反应取30只S-D雌鼠的新鲜垂体,匀浆缓冲液研磨重悬,Bradford法测蛋白浓度。在测试中,每孔分别加入100μl垂体匀浆液,5种不同浓度的荧光标记二聚体肽和对应的非标记GHRH二聚体,总体积300μl。每个测试重复2次,用荧光检测仪在490/525 nm波长下测荧光值。6大鼠垂体组织荧光染色分析福尔马林固定S-D大鼠垂体组织切片染色,染色方法如下:玻片浸泡在HEPES缓冲液3次,每次5分钟。在组织切片上滴加200μl含有76±1荧光强度的FITC-GHRH二聚体的HEPES缓冲液,37℃下孵育1小时。用HEPES缓冲液洗涤两次后,在切片上滴加DAPI水溶液(0.01克/毫升),37℃孵育15分钟。将切片洗涤后用荧光封固剂封片。此染色过程在暗环境中进行。结果:1 h GHRH类似物的纯度和分子质量反相高效液相色谱法分析h GHRH的纯度均大于95%,电喷雾质谱仪法分析肽的分子质量与实际分子质量一致。聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析h GHRH二聚体肽的纯度达到实验要求。2 h GHRH肽对大鼠垂体激素的释放活性2.1大鼠GH释放活性:以S肽的净r GH作为基准,2F或2Y肽的净r GH值在统计学上具有显著性差异(P0.05)。2F或2Y的最大净GH值比S肽高出30.6或36.5%。2D,2E,2F和2Y的活性分别为S肽的104±16.7%,94±32.6%,114±16.6%和122±14.5%。2F肽的I3值在统计学上比其P2或S肽的I3更高(P0.01)。2Y肽的I5的r GH孵育值高于S肽的I5的r GH孵育值(P0.01)。2.2 h GHRH类似物对垂体其它激素释放活性的分析:与标准S肽一样,GHRH二聚体肽没有增加垂体ACTH、PRL和LH的释放。3大鼠垂体GH释放抑制试验在5小时垂体保温试验中,在I3-I5孵育期间加入1.927μM的GHRH二聚体肽,0.482或1.927μM的GHIH,对大鼠GH的释放产生了明显的抑制效果。与不加肽的P2值比较,在I3-I5孵育期的低值数据表明,GHIH具有明显的抑制的大鼠GH释放作用,且具有剂量和时间依赖关系(P0.05或0.01)。4 GHRH二聚体肽与垂体GHRH受体结合试验S,2D,2E,2F和2Y肽与大鼠垂体细胞的受体进行特异性结合反应显示具有较高的特异性。h GHRH肽的结合强弱为2F2D2Y2ES,因而2F肽具有最大的垂体匀浆结合力(P0.05)。5大鼠垂体组织荧光染色经FITC标记的GHRH二聚体肽染色分布于细胞膜上,荧光染色的强度为2F2D2E2YS,其中2F肽在垂体细胞膜上的分布最强。结论:1通过大鼠GH释放/抑制活性分析、受体结合试验以及组织化学染色可以看出,h GHRH二聚体肽的2D,2E,2F和2Y具有良好的大鼠GH释放活性和相似的垂体激素释放特异性。2 2F具有最强的和最持久的活性,最强的垂体匀浆结合能力,垂体细胞染色中表现最为明显,这表明在垂体细胞膜上2F肽和GHRH受体之间的亲和力最强。因此,2F肽可以成为将来动物试验的一个不错的选择。3在GHRH促使GH方面释放,两个N末端GHRH二聚体肽比一个N末端的h GHRH1 44㖞NH2的效果更好。
【关键词】：人生长激素释放激素类似肽 二聚体肽 生物学活性
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R335
【目录】：
- 中文摘要4-7
- 英文摘要7-11
- 英文缩写11-12
- 前言12-13
- 材料和方法13-17
- 结果17-20
- 附图20-25
- 附表25-29
- 讨论29-31
- 结论31
- 参考文献31-34
- 综述 生长激素释放激素类似物的研究进展34-43
- 参考文献38-43
- 致谢43-44
- 个人简历44
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张勇;;D-二聚体的检测及临床应用[J];内蒙古民族大学学报(自然科学版);2011年04期
2 宋艳茹;杨小红;张静;;D-二聚体检测值的临床影响因素分析[J];科技信息;2013年07期
3 程云华,刘芳,姚锦绣;血清D-二聚体的检测与临床意义[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);1998年04期
4 杨频,贺小凤,郝鸣鸿;分子力学方法在核苷酸十二聚体结构问题上的应用[J];科学通报;1992年22期
5 杨其伟;张自立;;二聚体参与转录调节[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1992年03期
6 唐洁,马先勇;不同溶剂中tBuNO二聚体裂解机理的研究[J];吉首大学学报(自然科学版);1992年01期
7 李宇宁,宁玲;D-二聚体检测与小儿肾病高凝状态的关系[J];甘肃科技;1999年01期
8 郑柯文,俞庆森,蒋勇军,马国正,赵文娜,曾敏;静电和疏水效应对SARS冠状病毒3CL蛋白酶二聚体稳定性的影响[J];高等学校化学学报;2005年01期
9 马翠满;张瑞峰;廖骏伟;郑瑞清;;金银合金纳米笼二聚体光学性质的研究[J];光散射学报;2013年04期
10 李宇宁;D─二聚体与血栓性疾病[J];甘肃科技;1998年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王英虹;裴冰;;检测老年重症患者D-二聚体的临床意义[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
2 李彩霞;王伟;楼亚玲;;D二聚体在急性早幼粒细胞白血病中的应用[A];第四届全国临床检验学术会议论文汇编[C];2006年
3 王文工;董卫国;张稳健;马杰;;两种检测D-二聚体方法的相关性分析[A];中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2012年
4 范雅稚;;D-二聚体的检测在眼恶性肿瘤的诊断与病情监测中的临床意义[A];第十四届西北五省眼科学术大会论文集[C];2013年
5 "D-二聚体检测"急诊临床应用专家共识组;;“D-二聚体检测”急诊临床应用专家共识[A];《中华急诊医学杂志》第十二届组稿会暨第五届急诊医学青年论坛论文汇编[C];2013年
6 王文工;董卫国;张稳健;马杰;;两种检测D-二聚体方法的相关性分析[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
7 王文工;马杰;;两种检测D-二聚体的相关性分析[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
8 朱慧敏;;106例产后母体D二聚体升高的临床观察[A];浙江省第二十届基层卫生改革与发展学术会议大会论文集[C];2012年
9 韩瑞丽;王小娥;钟殿胜;程方圆;张霞;董丽霞;陈哲;;血浆D-二聚体正常的22例肺栓塞分析[A];中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编[C];2013年
10 杨芳年;王友祥;;D-二聚体检测在血栓性疾病诊断中的应用[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 吴宇;基于二聚体卟啉传感阵列的构建及检测应用研究[D];重庆大学;2014年
2 夏乾峰;二聚体突变引物定量PCR技术的研发及其临床应用[D];重庆医科大学;2011年
3 陈俊;可溶性HLA-G二聚体在“人—鼠”异种移植物抗宿主病模型中的作用研究[D];华中科技大学;2013年
4 李照民;NRG-1诱导ErbB异源二聚体间反式磷酸化及其对下游信号通路调控的研究[D];复旦大学;2004年
5 钟晨;天然产物白藜芦醇二聚体的全合成及其衍生物的设计和活性研究[D];复旦大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冀利妃;二聚体阳离子体系的结构、稳定性和成键特性的理论研究[D];西南大学;2015年
2 吴玉塘;D-二聚体与冠状动脉粥样硬化性心脏病冠脉病变程度相关性分析[D];福建医科大学;2015年
3 白著晓;INNOVANCE测定血浆D-dimer的分析性能评价及其在APTE诊断中的探讨[D];石河子大学;2015年
4 胡延伟;血浆D-二聚体在下肢深静脉血栓形成诊治过程中检测的临床意义及分析[D];河北医科大学;2015年
5 张旭东;人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用[D];河北医科大学;2015年
6 张晋东;血清降钙素原、D-二聚体水平与急性冠状动脉综合征的相关性研究[D];郑州大学;2015年
7 李丹丹;血浆D-二聚体与年龄等影响因素的相关性研究[D];南方医科大学;2012年
8 隋鑫;2000例D-二聚体升高患者临床意义探讨[D];吉林大学;2014年
9 谢波;D-二聚体候选参考物质研制及结果一致化相关问题探讨[D];北京协和医学院;2013年
10 赵伯翔;D-二聚体监测在治疗急性髂股静脉血栓形成中的临床价值[D];南京医科大学;2013年
本文关键词：人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用，由笔耕文化传播整理发布。
，本文编号：318272
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/318272.html
