驱动蛋白Eg5调控卵子成熟的机制研究

发布时间：2021-05-21 09:36

　　哺乳动物卵母细胞的正常发育是确保卵子成熟、受精以及胚胎发育的前提条件,是生命起始的物质基础。卵母细胞的成熟必须经过一个精密而复杂的减数分裂过程,DNA复制一次,但是经过两次减数分裂,生成了一个单倍体配子和两个极体。在这一系列过程中,涉及许多关键的生物学事件:微管的组装及其动态变化、动粒-微管的连接、染色体的排列与分离等。只有当所有事件完整无误的完成后,才能保证遗传物质的精确分配。如果在此过程中任何一个事件出现错误都将导致减数分裂失败。Eg5作为驱动蛋白的家族成员,参与了有丝分裂双极纺锤体的形成和维持,在有丝分裂中起着重要的作用。但是Eg5是否能够影响卵母细胞减数分裂过程以及作用机理尚不明确。由于猪卵母细胞在发育和生理上和人类更相似,本文旨在探究Eg5对猪卵母细胞减数分裂过程中的内在调控机制,为卵母细胞发育成熟和质量控制提供理论基础。本实验选取猪卵母细胞作为研究对象,利用猪卵母细胞体外培养体系,免疫荧光染色和免疫印迹等技术来探究Eg5特异性抑制剂monastrol影响猪卵母细胞质量变化的规律,探索Eg5调控卵母细胞成熟的影响因素及作用机制。本实验主要研究结果如下:在本研究中首先通过体外添... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 研究背景
    第一章 哺乳动物卵母细胞的减数分裂成熟
        1. 卵母细胞减数分裂成熟过程
            1.1 生发泡破裂(GVBD)
            1.2 第一次减数分裂
            1.3 第二次减数分裂
        2. 减数分裂成熟过程中重要的生物学组件
            2.1 纺锤体
            2.2 微丝
            2.3 线粒体
            2.4 皮质颗粒
            2.5 Ovastacin
    第二章 分子马达
        1. 分子马达
            1.1 肌球蛋白(Myosin)
            1.2 动力蛋白(Dynein)
            1.3 驱动蛋白(Kinesin)
第二部分 实验研究
    第三章 抑制Eg5活性阻断卵母细胞发育和成熟分裂进程
        1. 实验材料
            1.1 抗体和试剂
            1.2 主要仪器和设备
            1.3 试剂的配制
        2. 实验方法
            2.1 猪卵母细胞的收集和体外成熟
            2.2 免疫荧光染色
            2.3 激光共聚焦显微镜观察
            2.4 统计分析
        3. 实验结果
            3.1 抑制Eg5活性对猪卵母细胞发育的影响
            3.2 抑制Eg5活性对猪卵母细胞第一极体排出率的影响
        4. 讨论
        5. 小结
    第四章 抑制Eg5活性对卵母细胞的核成熟的影响
        1. 实验材料
            1.1 抗体
            1.2 试剂
            1.3 主要的仪器和设备
            1.4 试剂的配制
        2. 实验方法
            2.1 猪卵母细胞的收集和体外成熟
            2.2 纺锤体的免疫荧光染色
            2.3 微管乙酰化的免疫荧光染色
            2.4 激光共聚焦显微镜观察
            2.5 免疫蛋白印迹(Western Blot)
            2.6 统计分析
        3. 实验结果
            3.1 抑制Eg5活性影响卵母细胞的纺锤体以及染色体的形态
            3.2 抑制Eg5活性增加了卵母细胞纺锤体以及染色体的异常率
            3.3 抑制Eg5降低了猪卵母细胞微管稳定性
        4. 讨论
        5. 小结
    第五章 抑制Eg5活性对卵母细胞的胞质成熟的影响
        1. 实验材料
            1.1 抗体
            1.2 试剂
            1.3 主要的仪器和设备
            1.4 试剂的配制
        2. 实验方法
            2.1 猪卵母细胞收集和体外成熟
            2.2 免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜观察
            2.3 统计分析
        3. 实验结果与分析
            3.1 抑制Eg5活性影响卵母细胞中肌动蛋白微丝的分布
            3.2 抑制Eg5活性影响卵母细胞中线粒体的完整性
            3.3 抑制Eg5对猪卵母细胞中皮质颗粒的分布的影响
            3.4 抑制Eg5影响卵母细胞ovastacin的分布
        4. 讨论
        5. 小结
全文结论
创新性
参考文献
符号及缩略语表
在读期间发表论文
致谢



本文编号：3199477