E型沙眼衣原体主要外膜蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2021-06-08 04:06

　　目的制备E型沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）主要外膜蛋白（major outer membrane protein,MOMP）多克隆抗体,并在体外检测其生物学特性。方法通过分子克隆方法构建重组表达质粒pET21a（+）/MOMP,转化E.coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达重组MOMP蛋白,经镍螯合亲和层析胶纯化后,经皮下多点注射免疫日本大耳白兔,制备兔多克隆抗体,分别采用ELISA和Western blot法检测抗体的效价和特异性。在HeLa细胞中培养E血清型Ct,通过卢戈和吉姆萨染色法观察细胞中Ct包涵体的形成情况,间接免疫荧光法检测制备的MOMP多克隆抗体对Ct天然MOMP的结合特异性。结果 Ct MOMP可在原核表达系统中高效表达;制备的兔抗MOMP多克隆抗体ELISA效价可达1∶256 000,可特异性结合、识别融合及天然的Ct MOMP。结论制备的兔抗Ct MOMP多克隆抗体效价高、特异性强,为后续进一步研究Ct的致病机制及开发新的免疫诊断制剂奠定了基础。 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020,33(09)CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

重组表达质粒pET21a（+）/MOMP的双酶切（NdeⅠ/XhoⅠ）鉴定

Western blot分析显示，纯化的重组MOMP蛋白可与兔抗MOMP多克隆抗体反应，在相对分子质量约40 000处出现阳性反应条带，见图4。表明制备的多克隆抗体可特异性识别MOMP重组蛋白。图3 Ct MOMP兔血清抗体效价

Ct MOMP兔血清抗体效价

【参考文献】：
期刊论文
[1]沙眼衣原体主要外膜蛋白生物信息学分析[J]. 朱珊丽,尤孙武,娄崇洁,龚红君,张丽芳.  温州医学院学报. 2009(01)



本文编号：3217659