人肝癌裸鼠模型建立及苦参碱与顺铂联合对肝癌移植瘤和Survivin、Caspase-3表达的影响

发布时间：2017-04-24 09:04

  本文关键词：人肝癌裸鼠模型建立及苦参碱与顺铂联合对肝癌移植瘤和Survivin、Caspase-3表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:建立人肝癌细胞裸鼠移植瘤模型,并应用于苦参碱(Matrine,Ma)及其联用顺铂(Cisplatin,DDP)对人肝癌裸鼠移植瘤生长和生存素(Survivin)及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)基因蛋白表达水平的影响,探讨其抑制肝癌的效果,阐明其在促肿瘤凋亡方面可能存在的机制。方法:将人肝癌细胞株HepG2注入BALB/c裸鼠腋部皮下建立移植瘤模型,随机分为6组:生理盐水(NS)对照组、Ma组(分别为给药1、2、3wk组)、DDP组及Ma和DDP联合组,均采用腹腔注射给药。期间观察裸鼠的全身状况、接种部位成瘤时间;测量动物体质量、瘤体体积,绘制体重变化曲线与瘤体生长曲线图;用药14d后处死实验裸鼠称瘤重,计算抑瘤率以及采用HE染色法进行瘤组织的病理学观察;免疫组织化学法检测瘤组织中凋亡相关蛋白Survivin与Caspase-3的表达。结果:将5.0×106个人肝癌细胞HepG2种植于裸鼠腋部皮下造移植瘤模型成功,成瘤率达100%;观察发现Ma对肝癌皮下移植瘤有抑制作用,给药1、2、3 wk组的抑瘤率分别为8.3%、37.5%、54%,给药3、2 wk组与NS、1 wk组比较差异具有统计学意义(均P0.01),给药3wk组与2 wk组比较、给药1 wk组与NS组比较差异也具统计学意义(P0.05),DDP单用对裸鼠移植瘤抑瘤率为75%,Ma和DDP联用可明显抑制瘤体生长,其抑瘤率达83.3%,明显高于Ma或DDP单用组,差异具有统计学意义(P值均0.05)。各Ma组裸鼠的体质量等全身状况未出现明显降低且组间差异不明显,Ma+DDP组裸鼠的平均体质量为21.5g,比NS组(28.5g)及Ma组(26.67g)低,但较DDP组(17.33g)高且精神、活动、食量等全身状况也明显优于DDP组。HE染色给药组癌组织基本结构和癌细胞形态与对照组无明显变化,均为肝实体瘤组织,不同之处是给药组可见数量、大小不等的凋亡细胞和凝固性坏死灶。Ma+DDP组瘤组织中Survivin的阳性细胞率为(19.58±4.52)%,较NS组(83.26±15.56)%、1wk组(79.58±16.36)、2wk组(62.50±8.09)、3wk组(55.56±8.16)%及DDP组(38.67±8.26)%降低,差异具有统计学意义(P值均0.05)。与之相对的,NS组、1wk组、2wk组、3wk组及DDP组Caspase-3的阳性细胞率分别为:(21.15±3.68)%、(24.65±2.29)%、(35.13±10.57)%、(43.68±10.96)%、(65.88±4.81)%,而Ma+DDP组较之明显升高,为(78.26±6.09)%,Ma+DDP组与其他组比较,差异亦具统计学意义(P值均0.05)。结论:将人肝癌细胞HepG2种植于裸鼠腋部皮下造移植瘤模型成功,成瘤率达100%;在肝癌模型中,Ma具有一定的抑瘤作用且无明显不良反应,早期给药比晚期给药抑瘤作用明显;Ma与DDP联用能增强DDP对裸鼠移植瘤的抑瘤作用和改善全身状况,降低DDP的毒副反应。其可能的作用机制是通过影响Survivin和Caspase-3的表达,而诱导肿瘤细胞发生凋亡。
【关键词】：肝细胞癌 苦参碱 顺铂 存活素 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7;R-332
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英汉缩略词对照表10-11
• 前言11-14
• 1 材料与方法14-23
• 1.1 研究对象14
• 1.2 主要实验器材与实验试剂14-15
• 1.2.1 主要实验仪器14-15
• 1.2.2 主要实验试剂15
• 1.3 实验方法15-23
• 1.3.1 细胞培养15-18
• 1.3.2 模型建立与给药干预18-20
• 1.3.3 观察指标20
• 1.3.4 大体解剖及组织病理学观察20-21
• 1.3.5 survivin和caspase-3 免疫组化检测及结果判定21-23
• 1.4 统计学处理23
• 2 结果23-33
• 2.1 模型建立23
• 2.2 全身状况23-24
• 2.3 瘤体生长情况及肿瘤体积24-26
• 2.4 瘤质量及抑瘤率26-27
• 2.5 病理组织学检查结果27-28
• 2.6 Survivin与Caspase-3 免疫组化结果28-33
• 3 讨论33-38
• 3.1 人肝癌动物肿瘤模型建立33
• 3.2 Ma对裸鼠体质量及肝癌移植瘤生长的作用分析33-34
• 3.3 Ma合用DDP对裸鼠体质量及肝癌移植瘤生长的作用分析34
• 3.4 HE染色结果分析34-35
• 3.5 Ma和DDP对人肝癌裸鼠皮下移植瘤Survivin/Caspase3表达的影响35-36
• 3.6 小结36-38
• 4 结论38-39
• 参考文献39-44
• 附录（综述）44-58
• 参考文献52-58
• 攻读学位期间发表的学术论文目录58-59
• 致谢59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 屈飞;崔艳茹;徐镜;;苦参碱对小鼠H22细胞抗肿瘤作用及其机制研究[J];肿瘤药学;2011年04期

  本文关键词：人肝癌裸鼠模型建立及苦参碱与顺铂联合对肝癌移植瘤和Survivin、Caspase-3表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：323888