体外构建人羊膜间充质干细胞膜片及成骨分化潜能

发布时间：2021-06-27 20:50

　　背景:人羊膜间充质干细胞属于成体干细胞,其来自于废弃的胎盘,来源广泛,可以无创获取,具有免疫原性低、生长周期短等特点,是组织工程种子细胞的重要来源,目前人羊膜间充质干细胞已经用于临床糖尿病的治疗。目的:探索一种简便的方法构建人羊膜间充质干细胞膜片,并研究其成骨分化潜能。方法:将第3代人羊膜间充质干细胞高密度接种于普通培养皿中,加入成膜片诱导培养基以构建人羊膜间充质干细胞膜片,通过组织学染色以及扫描电镜观察细胞膜片的特性。取第3代人羊膜间充质干细胞高密度接种于培养皿中,加入成膜片诱导培养基培养7 d,再换用成骨诱导培养基培养14 d以构建成骨诱导的人羊膜间充质干细胞膜片。通过茜素红染色、免疫组化染色、碱性磷酸酶活性、RT-PCR以及Westernblot检测人羊膜间充质干细胞膜片的成骨分化潜能。结果与结论:①苏木精-伊红染色可见人羊膜间充质干细胞膜片由多层细胞累积而成,细胞分布均匀;②扫描电镜观察可见人羊膜间充质干细胞膜片呈复层结构,胞外有大量的胞外基质产生,细胞包埋于胞外基质中;③人羊膜间充质干细胞膜片成骨诱导14 d,茜素红染色后可见橘红色沉淀,免疫组化染色后细胞周围有大量Ⅰ型胶原产... 

【文章来源】：中国组织工程研究. 2020,24(25)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

人羊膜间充质干细胞膜片组织学观察及扫描电镜检测

成骨诱导人羊膜间充质干细胞膜片茜素红染色、免疫组化染色及碱性磷酸酶活性定量检测

图3 成骨诱导人羊膜间充质干细胞膜片茜素红染色、免疫组化染色及碱性磷酸酶活性定量检测实验成功构建了人羊膜间充质干细胞膜片，但是获取的细胞膜片是否具有成骨分化潜能，对于组织工程骨的构建至关重要。该实验利用成骨诱导培养基培养人羊膜间充质干细胞膜片，培养14 d后碱性磷酸酶活性明显增高；茜素红染色结果显示细胞外基质中有橘红色的结节产生；免疫组化结果显示细胞周围有大量Ⅰ型胶原产生；RT-PCR和Western blot结果显示Ⅰ型胶原、骨钙蛋白以及Runt相关转录子2的mRNA水平及其蛋白表达明显增高，差异有显著性意义(P<0.05)，表明诱导的人羊膜间充质干细胞膜片具有良好的成骨分化潜能。

【参考文献】：
期刊论文
[1]同种异体骨移植与自体骨移植修复四肢粉碎性骨折:骨性愈合及骨活性比较[J]. 杜辉,付勤.  中国组织工程研究. 2015(08)
[2]Cell sheet technology for regeneration of esophageal mucosa[J]. Ryo Takagi,Masayuki Yamato,Nobuo Kanai,Daisuke Murakami,Makoto Kondo,Takaaki Ishii,Takeshi Ohki,Hideo Namiki,Masakazu Yamamoto,Teruo Okano.  World Journal of Gastroenterology. 2012(37)



本文编号：3253582