细粒棘球绦虫AQP-9多肽抗体的制备及免疫定位
发布时间：2021-06-29 11:11
目的:建立经济、高效的非疫区实验室细粒棘球蚴生发细胞的原代培养方法。制备细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多克隆抗体,确定其在细粒棘球蚴生发细胞内的细胞定位及在原头蚴、棘球蚴囊壁中的组织分布。为进一步研究细粒棘球蚴水通道蛋白与囊液形成之间的关系奠定基础。方法:1.0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液对鼠源次生细粒棘球蚴囊壁消化1030 min后进行贴壁,探索最佳消化时间。2.倒置显微镜下观察以最佳消化时间消化后的细粒棘球蚴囊壁残片贴壁培养法和单纯组织贴壁培养法行生发细胞培养的细胞形态改变并对比生长曲线。3.免疫荧光鉴定经残片培养法获得的细粒棘球蚴生发细胞。4.行经残片培养法获得的细粒棘球蚴生发细胞的小鼠腹腔返种试验并取病变组织行HE染色后观察。5.利用生物信息学的方法预测Eg AQP 9的亚细胞定位。6.利用生物信息学的方法分析并设计EgAQP 9序列免疫多肽并免疫新西兰兔。7.SDS-PAGE检测制备的Eg AQP 9多肽抗体的纯化效果,酶联免疫吸附试验测定该多抗滴度。8.免疫印迹法鉴定EgAQP 9蛋白。免疫荧光检测EgAQP 9在细粒棘球蚴生发细胞内的细胞定位,免疫组化...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
典型生发细胞形态(×400)
包括梭形、三角形、椭圆形或者圆形（图 1）。观察消化后掉落的生发层小残片可见典型生发细胞游出状态（图2）。待生发细胞贴壁后密切观察其增殖状态，动态观察可发现其以集落状态向四周发散，中央处细胞密集，细胞形状似鹅卵石，外周扩散的细胞呈现梭状（图 4b）。图 1 典型生发细胞形态 ( ×400)a:三角形； b:梭型； c：圆形； d：椭圆形Fig. 1 Typical morphology of germinal cell ( ×400)a：triangled cell; b: spindled cell; c:rounded cell; d:oval cell
图 3 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁残片后培养 2 d 时的生发细胞的游出状态（ ×400）a： 胰蛋白酶溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁碎片 10 min 后培养，残片组织边缘游离出完整的生发细胞，几乎不见裸核且胞质丰富且呈明显梭型化；b：胰蛋白酶溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁碎片 20 min 后培养，残片组织边缘游离出相对完整的生发细胞，含少量裸核且胞质丰富、多椭圆形和圆形；c: 胰蛋白酶溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁碎片 30 min 后培养，残片组织边缘游离出生发细胞，多仅存在裸核且细胞破裂，有散在的钙颗粒。Fig. 3 The released germinal cells from digested debris of hydatid cyst walls from mice andcultured for 2 days（ ×400）a: After digestion with trypsin solution for 10 min, the intact and spindle-shaped germinal cellswere released from the edge of the cyst walls debris, with few naked nuclei and abundantcytoplasm; b: After digestion with trypsin solution for 20 min, relatively intact germinal cellswere released from the edge of the cyst walls debris, with a few naked nuclei and abundant
【参考文献】：
期刊论文
[1]弓形虫沉默信号调节子2（TgSir2）的克隆表达与多克隆抗体制备[J]. 张芳菲,曹佳欣,王晨红,毛懿杰,华倩倩,刘淑贤,谭峰,胡昕. 中国人兽共患病学报. 2019(02)
[2]细粒棘球绦虫原头蚴水通道蛋白编码基因的转录组分析[J]. 范俊杰,吴宏烨,李锴,叶彬. 中国病原生物学杂志. 2018(11)
[3]抗刚地弓形体单克隆抗体制备鉴定及初步应用[J]. 闫文娟,崔京涛,解宏杰,张伟红,王巧凤,许少侠,倪安平. 标记免疫分析与临床. 2018(10)
[4]弓形虫TgMIC16多克隆抗体制备 纯化及其在亚细胞定位中的应用[J]. 魏冬冬,王龙江,李瑾,崔勇,尹昆,黄炳成,魏庆宽,雷战,孙慧. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(04)
[5]原头蚴成囊过程中内参基因的确定及水通道候选基因的转录表达[J]. 王芬,刘许诺,吴宏烨,李锴,范俊杰,叶彬. 第三军医大学学报. 2018(17)
[6]两种棘球绦虫的水通道蛋白基因克隆及功能特性的比较[J]. 刘许诺,王芬,吴宏烨,李锴,范俊杰,叶彬. 中国人兽共患病学报. 2018(06)
[7]棘球蚴病药物治疗的研究进展[J]. 徐硕,党志胜,张皓冰,胡薇,赵玉敏. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[8]细粒棘球蚴病病原分类学与分子流行病学研究进展[J]. 尚婧晔,张光葭,何伟,喻文杰,廖沙,王奇,陈凡,李汭芮,王谦,钟波,黄燕. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(02)
[9]2012-2016年中国棘球蚴病抽样调查分析[J]. 伍卫平,王虎,王谦,周晓农,王立英,郑灿军,曹建平,肖宁,王莹,朱曜宇,牛彦麟,薛垂召,曾祥嫚,房琦,韩帅,余晴,杨诗杰,付青,白雪飞,田添,李军建,张梦媛,吴文婷,张山山,侯岩岩,冯宇,马宵,李斌,李凡卡,郭卫东,杨亚明,吴向林,金小林,张红卫,于石成. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(01)
[10]西藏自治区棘球蚴病病例分析[J]. 陈伟奇,张雅兰,贡桑曲珍,伍卫平,韩帅,薛垂召,郑灿军,艾佳佳. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(01)
本文编号：3256340
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
典型生发细胞形态(×400)
包括梭形、三角形、椭圆形或者圆形（图 1）。观察消化后掉落的生发层小残片可见典型生发细胞游出状态（图2）。待生发细胞贴壁后密切观察其增殖状态，动态观察可发现其以集落状态向四周发散，中央处细胞密集，细胞形状似鹅卵石，外周扩散的细胞呈现梭状（图 4b）。图 1 典型生发细胞形态 ( ×400)a:三角形； b:梭型； c：圆形； d：椭圆形Fig. 1 Typical morphology of germinal cell ( ×400)a：triangled cell; b: spindled cell; c:rounded cell; d:oval cell
图 3 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁残片后培养 2 d 时的生发细胞的游出状态（ ×400）a： 胰蛋白酶溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁碎片 10 min 后培养，残片组织边缘游离出完整的生发细胞，几乎不见裸核且胞质丰富且呈明显梭型化；b：胰蛋白酶溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁碎片 20 min 后培养，残片组织边缘游离出相对完整的生发细胞，含少量裸核且胞质丰富、多椭圆形和圆形；c: 胰蛋白酶溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁碎片 30 min 后培养，残片组织边缘游离出生发细胞，多仅存在裸核且细胞破裂，有散在的钙颗粒。Fig. 3 The released germinal cells from digested debris of hydatid cyst walls from mice andcultured for 2 days（ ×400）a: After digestion with trypsin solution for 10 min, the intact and spindle-shaped germinal cellswere released from the edge of the cyst walls debris, with few naked nuclei and abundantcytoplasm; b: After digestion with trypsin solution for 20 min, relatively intact germinal cellswere released from the edge of the cyst walls debris, with a few naked nuclei and abundant
【参考文献】：
期刊论文
[1]弓形虫沉默信号调节子2（TgSir2）的克隆表达与多克隆抗体制备[J]. 张芳菲,曹佳欣,王晨红,毛懿杰,华倩倩,刘淑贤,谭峰,胡昕. 中国人兽共患病学报. 2019(02)
[2]细粒棘球绦虫原头蚴水通道蛋白编码基因的转录组分析[J]. 范俊杰,吴宏烨,李锴,叶彬. 中国病原生物学杂志. 2018(11)
[3]抗刚地弓形体单克隆抗体制备鉴定及初步应用[J]. 闫文娟,崔京涛,解宏杰,张伟红,王巧凤,许少侠,倪安平. 标记免疫分析与临床. 2018(10)
[4]弓形虫TgMIC16多克隆抗体制备 纯化及其在亚细胞定位中的应用[J]. 魏冬冬,王龙江,李瑾,崔勇,尹昆,黄炳成,魏庆宽,雷战,孙慧. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(04)
[5]原头蚴成囊过程中内参基因的确定及水通道候选基因的转录表达[J]. 王芬,刘许诺,吴宏烨,李锴,范俊杰,叶彬. 第三军医大学学报. 2018(17)
[6]两种棘球绦虫的水通道蛋白基因克隆及功能特性的比较[J]. 刘许诺,王芬,吴宏烨,李锴,范俊杰,叶彬. 中国人兽共患病学报. 2018(06)
[7]棘球蚴病药物治疗的研究进展[J]. 徐硕,党志胜,张皓冰,胡薇,赵玉敏. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[8]细粒棘球蚴病病原分类学与分子流行病学研究进展[J]. 尚婧晔,张光葭,何伟,喻文杰,廖沙,王奇,陈凡,李汭芮,王谦,钟波,黄燕. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(02)
[9]2012-2016年中国棘球蚴病抽样调查分析[J]. 伍卫平,王虎,王谦,周晓农,王立英,郑灿军,曹建平,肖宁,王莹,朱曜宇,牛彦麟,薛垂召,曾祥嫚,房琦,韩帅,余晴,杨诗杰,付青,白雪飞,田添,李军建,张梦媛,吴文婷,张山山,侯岩岩,冯宇,马宵,李斌,李凡卡,郭卫东,杨亚明,吴向林,金小林,张红卫,于石成. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(01)
[10]西藏自治区棘球蚴病病例分析[J]. 陈伟奇,张雅兰,贡桑曲珍,伍卫平,韩帅,薛垂召,郑灿军,艾佳佳. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(01)
本文编号：3256340
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3256340.html
