一株新的蚊浓核病毒AalDV-7的分离、鉴定和病原学分析
发布时间：2021-06-30 15:32
研究背景:蚊虫传播的病毒性疾病（Mosquito-borne viral diseases,MBVDs）对全球公共卫生构成了严重威胁,严重危害人类生命健康,影响社会的稳定。蚊虫防制仍然是综合蚊虫管理（Integrate mosquito management,IMM）计划中的核心干预策略,以减少MBVDs的传播。传统的化学农药是目前使用最频繁和最广泛的控制蚊虫的方法,然而,化学农药对生态系统造成了严重的负面影响,蚊虫也出现了杀虫剂抗性（Insecticide resistance,IR）问题,这使得开发新的蚊虫防制方法至关重要。而生物杀虫剂的研究与应用将为蚊虫的防制提供新的策略。生物防制主要应用蚊虫真菌,细菌、病毒等病原体、天敌等来达到防治效果,对非靶标生物和有益生物无毒害,不危害生态系统,蚊虫对其不易产生抗性。蚊浓核病毒（Mosquitodensovirus,MDVs）属于蚊虫特异性病毒,特异性感染蚊类,可以在自然界中垂直传播和水平传播。高滴度病毒可以直接杀伤蚊类,低滴度可以影响蚊类寿命、产卵量、孵化率等,从而降低媒介种群数量。目前多种MDVs的全基因组己经成功构建为感染性克隆质粒载...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－３．?ＡａｌＤＶ－７的基因组结构??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ＡａｌＤＶ－７?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?
??结构蛋白基因ＮＳ１和ＮＳ２和结构蛋白基因ＶＰ的３＇ＲＡＣＥ?（图１－４Ｃ）。如图１－４Ｃ??所示，在ＶＰ３＇ＲＡＣＥ中仅检测到明显的条带，经过测序显示多聚腺苷酸化开始??于ＶＰ基因翻译终止密码子ＴＡＡ的下游６０ｎｔ。此外，ＮＳ１／ＮＳ２?３’ＲＡＣＥ可扩??增出２５１１?ｂｐ的ＰＣＲ产物，经测序分析，其与ＶＰ基因共有一个共同的ＴＴＳ。??由于ＮＳ１?／ＮＳ２和ＶＰ基因共有共同的转录起始位点，理论上可从ＶＰ?５＇ＲＡＣＥ??获得２，３３６?ｂｐ的产物，但是在实验中未能扩増出相应大小的条带。因此，我们??通过ＲＴ－ＰＣＲ来确认总ＲＮＡ中确实存在该完整转录本（引物ＲＴＦ和ＲＴＲ），??结果与预期一致（图卜４Ｄ）。??Ａ?ＲＴｆ??４?ＶＰ＾ＮＰ?ＷＰＳ＇Ｐ?ＲＴＲ??１?ＮＳ２?；?ＮＳ１?Ｉ?Ｉ?ＶＰ??ＮＳ３＿Ｐ?ＮＳ３．ＮＰ?ＶＰ３．Ｐ?ＶＰ３．ＮＰ??ｍＲＮＡ??■?｜??Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｓｔａｒｔ?ｓｉｔｅ??Ｂ??５＇ＲＡＣＥ?Ｄ??ｊ?叮
１２?ｈ．ｐ．ｔ．后在ｐＶＰ－ＤｓＲｅｄ中的细胞中观察到ＤｓＲｅｄ表达。在约４８?ｈ．ｐ．ｔ．后，??可以检测到最大荧光强度。可以观察到，ＮＳ１和ＮＳ２?ＤｓＲｅｄ融合表达蛋白均位??于Ｃ６／３６细胞的细胞核和细胞质中，但主要位于细胞核中（图１－７Ｂ）。三种蛋??白质均匀分布在细胞核中（ｐＮＳｌ－ＤｓＲｅｄ和ｐＮＳ２－ＤｓＲｅｄ的上行图片中），而ＮＳ１??和ＮＳ２在细胞核中也可呈现点灶状分布（ｐＮＳｌ－ＤｓＲｅｄ和ｐＮＳ２－ＤｓＲｅｄ的下行图??片中）。这些结果表明ＮＳｌ，?ＮＳ２和ＶＰ的ＮＬＳ确实发挥了核定位功能，将蛋??白质从细胞质转运到细胞核中。ＮＳ１和ＮＳ２在病毒ＤＮＡ复制过程中发挥作用，??而ＶＰ主要聚集到细胞核中用于病毒组装。??Ａ?ｐＮＳｌ－ＤｓＲｅｄ?ｐＮＳ２－０ｓＲｅｄ??＼?ＩＲｓｌ?ＮＳ１?｜?ＮＳ２￣｜?ｉ?ＤｓＲｅｄ?ＴｌＲｓＮ?＜?ＩＲｓ｜?ＮＳ１?｜?ＮＳ２?ｊ?ＤｓＲｅｄ?！?ＩＲｓ＾＞??ｐＶＰ?ｐＶＰＮＬＳ－ＤｓＲｅｄ??，１?ｎ￣＼??ｖ?ＩＲｓ?ＮＳ１?ｌ?ＮＳ２?ＤｓＲｅｄ?｜ＪＲｓ〉??Ｂ??ＤＡＰ！?ＯｓＲｅｄ?Ｍｅｒｇｅ?ＤＡＰＩ?Ｏｓｆｉｅｄ?Ｍｅｒｇｅ??图１－７．?ＡａｌＤＶ－７的ＮＳｌ，?ＮＳ２和ＶＰ蛋白的在Ｃ６／３６细胞的亚细胞定位??２４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]蜚蠊防制中的高科技新生物技术——利用信息素诱引的蜚蠊病毒生物防制技术[J]. 岳木生,张令要. 中国媒介生物学及控制杂志. 2001(04)
本文编号：3258010
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－３．?ＡａｌＤＶ－７的基因组结构??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ＡａｌＤＶ－７?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?
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【参考文献】：
期刊论文
[1]蜚蠊防制中的高科技新生物技术——利用信息素诱引的蜚蠊病毒生物防制技术[J]. 岳木生,张令要. 中国媒介生物学及控制杂志. 2001(04)
本文编号：3258010
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