Tim-3对巨噬细胞糖代谢的调节机制研究

发布时间：2021-07-07 22:23

　　研究背景巨噬细胞是人体内第一道免疫防线。在不同的局部微环境中,巨噬细胞具有极强的可塑性,能表现出截然不同的功能状态,而这些功能状态具有抑制或促进疾病进展的作用。因此针对巨噬细胞不同的功能表型及其内在机制的研究得到人们的极大关注。前期大量研究结果表明:巨噬细胞的功能表型表达异常,与多种影响人们生活质量和预期生命周期的免疫相关性疾病密切相关,如感染、自身免疫性疾病以及肿瘤等。巨噬细胞的促炎表型过强,导致自身免疫性疾病加重并进一步破坏人体自身正常组织;而促炎表型过弱,则导致感染性疾病进行性加重或肿瘤的进展和转移。与巨噬细胞的表型与其细胞内部的葡萄糖代谢方式密切相关。供能影响巨噬以调控其最终改善细胞免疫球蛋白及粘蛋白-3（T cell immunoglobulin and mucin domain 3,Tim-3）,是一类表达于巨噬细胞、DC、NK细胞、NKT细胞以及支气管上皮细胞等多种细胞上的跨膜蛋白。由于Tim-3与其配体结合后能通过诱导凋亡等机制抑制细胞活化,维持体内免疫耐受,因此被认为是新一代的免疫调控靶点。完全有意义的是,我们前期研究提示,T从的角度,阐明,可,Tim-3信号是否调控... 

【文章来源】：军事科学院北京市

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

使用sTim-3阻断巨噬细胞Tim-3信号后，培养液上清的颜色变化

图 2 Western Blot 鉴定 Trx、sTim-3 蛋白功能通过上述实验方法获得 Trx，sTim-3 蛋白后，使用 His 抗体通过 Western Blot 鉴定 Trx 与 sTim-3 蛋白是否具有 His 蛋白结构（图 A），使用鼠源 Tim-3 抗体确认Trx 与 sTim-3 能否特异性结合 Tim-3（图 B）。3.2 sTim-3 阻断小鼠巨噬细胞后的培养液酸碱度变化使用 Trx（对照）、sTim-3 阻断鼠源巨噬细胞 Raw 264.7 的 Tim-3 信号后，分别维持刺激 0、6、12、24、36、48h，收集细胞培养液进行 PH 值检测（图 3）。结果发现在阻断 12h（t=7.676，p=0.0016）、24h（t=9.177，p=0.0008）、36h（t=13.64，p=0.0002）、48h（t=10.50，p=0.0005）时的组间 PH 差异均具有统计统计学意义，其中阻断 24h 的样品组之间 PH 值出现显著下降。因此下一步实验中拟设定 24h 为Tim-3 信号刺激实验时间。

3 阻断小鼠巨噬细胞 Tim-3 信号不同时间节点的培养液 PH 值变im-3 分别阻断巨噬细胞 Tim-3 信号 0、6、12、24、36、48h（n=3仪测定细胞培养液上清中 PH 值，并以 Trx 组为对照，进行相互比,**p<0.01，与对照组比较-3 信号激活/阻断对巨噬细胞增殖的影响用不同浓度的 Tim-3 信号激活/阻断剂连续刺激巨噬细胞 48h，信号照）与 sTim-3（实验）组间无统计学差异（图 5A）；信号激活组的im-3Agonis（t实验）组间无统计学差（图 5B）。因此，使用最高浓度达-3 信号激活剂或 20μg/ml 的信号阻断剂，连续刺激巨噬细胞 48h 并期产生明显影响。


本文编号：3270479