DNA复制过程中Cdc45泛素化修饰机制的研究
发布时间：2021-07-12 04:04
DNA复制是指DNA双链在细胞分裂间期进行的以一个亲代DNA分子为模板,合成两条子代DNA链的过程。在真核细胞中,DNA解旋酶复合体（Cdc45–Mcm–GINS helicase complex,简称CMG）在DNA复制过程中是形成和维持复制叉主要复合体,Cdc45做为CMG的重要组成分子之一,在调控DNA复制过程中扮演着重要的角色。泛素化指泛素分子在一系列酶的作用下,共价结合到靶蛋白上的过程,参与了真核生物几乎所有生命活动的调控。目前已有许多研究发现,在DNA复制及损伤修复过程中,多种相关蛋白受到泛素化修饰调控,以保障基因组的稳定。本研究中,我们以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）作为研究对象,探究Cdc45在DNA复制过程中是否存在泛素化修饰,并对其调控机制和在DNA复制中的作用进行初步研究。1)首先,我们通过外源诱导表达,确定了Cdc45的修饰性条带为泛素化条带,并通过点突变筛选出Cdc45上的泛素化位点K156和K643。2)然后,我们又通过细胞周期同步化处理和基因敲除等手段,证实Cdc45在复制期间会被泛素连接酶Dia2泛素化,泛素化的Cdc45又...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DNA复制起始的组装和激活（图片来自FragkosM,2015,NatRevMolCellBiol）
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文制起始位点处，并由 2 个 MCM2-7 头对头形成双六聚体环绕在 DNA 上[12]。但是MCM2-7 双六聚体是没有活性的，在 G1/S 期，在 DDK 和 CDK 的作用下，Cdc45和 GINS与之相连并激活其复制解旋酶活性，此后 MCM2-7的 AAA+ ATP 酶亚基以右旋螺旋形式包裹 ssDNA 沿着 3’-5’方向进行解旋[39-41]。MCM2-7 并不是完全封闭的环，MCM2-7 中的 MCM2 和 MCM5 之间有一个可以开启和关闭的“门”，通过开关不断将包住的双链 DNA 在解旋成单链 DNA 后排出，其开关的机制可能依赖MCM2 被 DDK 的动态磷酸化调控[42]。而最近对于 DNA 复制终止阶段的研究在不断进行中，已经发现在复制终止期间，MCM 会从染色体上解离，其依靠 MCM7 被Cullin–RING E3 泛素连接酶泛素化[43]。可以证实，MCM2-7 在 DNA 复制的起始、延伸以及终止阶段都具有重要作用。
dc45 在应答高水平和低水平的紫外伤害时的不同机制模型（图片em Soc Trans）。低水平的 UV 或 BPDE 诱导的 DNA 损伤以 Chk，不涉及 Cdc25A 和 CDK2 的变化。而高水平的诱导则会带来 C Cdc25A 的降解。由此产生的 CDK2 活性抑制可防止 Cdc45 在未. Models of the distinct mechanisms of Cdc45 regulation in respUV damage (From Broderick R, 2009, Biochem Soc Trans). Low DNA damage inhibit Cdc45 loading in a Chk1-dependent manner an25A and CDK2. High levels of induction results in the full activation ogradation of Cdc25A. The resulting inhibition of CDK2 activity prevnset of unactivated replication.说明，Chk1 在高剂量和低剂量 BPDE 处理下激活的 DN在低剂量下，Chk1 会不依赖 Cdc25A 而是通过抑制 Cd DNA 复制的继续进行。这也说明 Cdc45 在 DNA 损伤应
本文编号：3279163
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DNA复制起始的组装和激活（图片来自FragkosM,2015,NatRevMolCellBiol）
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文制起始位点处，并由 2 个 MCM2-7 头对头形成双六聚体环绕在 DNA 上[12]。但是MCM2-7 双六聚体是没有活性的，在 G1/S 期，在 DDK 和 CDK 的作用下，Cdc45和 GINS与之相连并激活其复制解旋酶活性，此后 MCM2-7的 AAA+ ATP 酶亚基以右旋螺旋形式包裹 ssDNA 沿着 3’-5’方向进行解旋[39-41]。MCM2-7 并不是完全封闭的环，MCM2-7 中的 MCM2 和 MCM5 之间有一个可以开启和关闭的“门”，通过开关不断将包住的双链 DNA 在解旋成单链 DNA 后排出，其开关的机制可能依赖MCM2 被 DDK 的动态磷酸化调控[42]。而最近对于 DNA 复制终止阶段的研究在不断进行中，已经发现在复制终止期间，MCM 会从染色体上解离，其依靠 MCM7 被Cullin–RING E3 泛素连接酶泛素化[43]。可以证实，MCM2-7 在 DNA 复制的起始、延伸以及终止阶段都具有重要作用。
dc45 在应答高水平和低水平的紫外伤害时的不同机制模型（图片em Soc Trans）。低水平的 UV 或 BPDE 诱导的 DNA 损伤以 Chk，不涉及 Cdc25A 和 CDK2 的变化。而高水平的诱导则会带来 C Cdc25A 的降解。由此产生的 CDK2 活性抑制可防止 Cdc45 在未. Models of the distinct mechanisms of Cdc45 regulation in respUV damage (From Broderick R, 2009, Biochem Soc Trans). Low DNA damage inhibit Cdc45 loading in a Chk1-dependent manner an25A and CDK2. High levels of induction results in the full activation ogradation of Cdc25A. The resulting inhibition of CDK2 activity prevnset of unactivated replication.说明，Chk1 在高剂量和低剂量 BPDE 处理下激活的 DN在低剂量下，Chk1 会不依赖 Cdc25A 而是通过抑制 Cd DNA 复制的继续进行。这也说明 Cdc45 在 DNA 损伤应
本文编号：3279163
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