SPA单结构域突变体组合噬菌体文库的构建及体外进化筛选

发布时间：2017-04-27 00:02

  本文关键词：SpA单结构域突变体组合噬菌体文库的构建及体外进化筛选，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的使用人免疫球蛋白G(IgG)对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)单结构域突变体组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同突变体组合的特异结合优势,探索优势组合分子结构与功能间的关系。方法通过Overlap PCR获得SPA中A和C单结构域突变体片段组合构成的噬菌体文库,再使用人IgG对文库进行体外亲和筛选,期望通过对特定结合分子的定向改造及体外进化获得具有高结合优势的组合分子。结果成功构建符合体外筛选要求的SPA单结构域A在29、30位氨基酸定点突变文库(A1)、SPA单结构域C在36、37位定点突变文库(C1)和SPA单结构域A在37位后插入3个氨基酸随机肽(AI37)、SPA单结构域C在20位后插入3个随机连接肽(CI20),将A1、C1随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库A1C1,将AI37、CI20随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库AI37CI20。两个文库各自经过4、5轮亲和筛选,文库进化完全。Phage-ELISA高光密度值的单克隆,测序结果分析为A(Q29K30)A(I29I30)和AI-TQSA。结论通过定向改造技术获得了高结合能力的定点突变分子A(Q29K30)A(I29I30)和插入突变分子AI37-TQSA,为Ig结合分子的定向改造及具有新的Ig结合特性的重组Ig结合分子的进一步研究奠定了基础。
【作者单位】： 安徽医科大学病理生理学教研室;第二军医大学病原生物学教研室;安庆医药高等专科学校;
【关键词】： AC突变体 噬菌体展示文库 筛选 人免疫球蛋白G
【基金】：国家高技术研究发展计划(863计划)(编号:SS2014AA021403) 国家自然科学基金(编号:30872405、30472050、30972632) 上海市科学技术委员会科研计划项目(编号:08JC1405200)
【分类号】：R392
【正文快照】： 2015-04-29接收自然界中许多细菌表达多种与宿主免疫球蛋白、血清白蛋白、纤维蛋白原等血清蛋白有结合活性的蛋白[immunogiobulin(Ig)-binding protions,IB-PS][1],介导细菌致病性。其中,典型代表有金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G及大消化链球菌蛋白L[2-4]。是由多个

【参考文献】

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1 沈毅s，

本文编号：329470