SOCS3基因沉默调控树突状细胞分化成熟在白念珠菌感染中的作用及免疫学机制初探

发布时间：2021-07-23 02:18

　　第一部分:siRNA介导的树突状细胞SOCS3基因沉默及沉默效率验证目的:构建小鼠骨髓来源树突状细胞体外扩增培养方法,并制备siRNA介导的SOCS3基因沉默树突状细胞。方法:（1）采用Lutz法在rmGM-CSF和rmIL-4共同刺激下从小鼠骨髓前体细胞诱导培养小鼠BMDC,并从形态学、细胞表面分子两方面对诱导培养的BMDC进行鉴定。（2）设计并合成了 3条靶向SOCS3基因的siRNA干扰序列,定向克隆到慢病毒表达载体GV248,经脂质体转染法转染BMDC,收集转染后48h的各组DC细胞,通过Western blot及qRT-PCR分别在蛋白及基因水平验证其沉默效率,筛选沉默效率最佳的siRNA干扰序列。（3）通过Annexin V-FITC荧光标记法和台盼蓝染色法检测siRNA转染对DC细胞活性的影响。结果:（1）体外诱导培养第8天即获得大量BMDC,倒置显微镜下观察细胞形态,大部分细胞悬浮离散,可见树枝状突起,具有DC的典型形态学特征。采用流式细胞术对诱导培养第8天DC表面分子情况进行检测,发现其高表达CDllc（>90%）,纯度满足下一步实验要求,低表达MHCII、CD... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：99 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２：倒置显微镜下观察ＤＣ形态（４０Ｘ）；?Ａ、Ｂ、Ｃ分别为培养第３、６、８天ＤＣ??３．１．２流ＤＣＣＤｌｌｃ、ＭＨＣＩＩ、ＣＤ８６、ＣＤ４０

细胞仪检测培养第８天ＤＣ表面⑶１１ｃ表测培养第８天ＤＣ表面ＭＨＣＩＩ、⑶４０、ＣＤ８低表达ＭＨＣＩＩ及共刺激分子ＣＤ４０、ＣＤ８６，态。???ＣＤ４０??ＨＣＩＩ＊?ＣＤ４０－?ＣＤ４０－＊?ＣＤ８６－１％?６３－４％?３６．６％?５４．２％ｉｆ?＾?ｆ１／?＼Ｊ?＼＾?，Ｌ??．＞??Ｈ??／＇?＇＇＊?ｉ?？＂■［?＇?＇?＇?ｉ＊＂＇ｌ?＇?＇?＇?■?＊?ｉ?■■■■?＇?＇?＇?ＦＩ?１?■?■?■?ｉ?＇?＇０?１０４?１０５?１０６?０?１０４细胞仪检测培养第８天ＤＣ表面分子表

转染４８ｈ后，通过ｑＲＴ－ＰＣＲ检测各组ＤＣ中ＳＯＣＳ３?ｍＲＮＡ水平。各组样品扩增曲??线均能达到平台期，表明各个样品均扩增完全，溶解曲线为单峰，表明ＰＣＲ引物具??有良好的特异性，ｑＲＴ－ＰＣＲ结果可靠（图４）。??ｓｉＲＮＡ＃ｌ?Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ＤＣ、ｓｉＲＮＡ＃２?Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ＤＣ、ｓｉＲＮＡ＃３?Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ＤＣ??组ＳＯＣＳ３?ｍＲＭ相对表达量均明显低于Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＣ组（Ｐ均〈０．０５），提示３条干扰??序列均能有效沉默Ｓ０ＣＳ３基因，干扰效率分别为７３．?７％、８３．?４％、７３．?５％，其中ｓｉＲＮＡ＃２??干扰序列的沉默效率最佳（Ｐ均〈０．０５）；?ｎｏｎ－ｔａｒｇｅｔ?ｓｉＲＮＡ?ｔｒｅａｔｅｄ?ＤＣ组与空白??对照组间Ｓ０ＣＳ３?ｍＲＮＡ相对表达量的差异无统计学意义（Ｐ＞０．?０５）。??２４??

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠骨髓树突状细胞对白念珠菌吞噬、杀伤作用的研究[J]. 王琼,史冬梅,刘维达.  中国真菌学杂志. 2016(04)
[2]SOCS3与LIGHT在诱导DC分化成熟中的相互作用[J]. 林苹,张洁,王琪,陆燕蓉,王修杰,熊竹娟,杨洪亮,任婧婧.  四川大学学报(医学版). 2007(04)



本文编号：3298384