猪骨髓间充质干细胞分离培养及生物学特性
发布时间：2021-07-31 10:23
采集健康猪股骨骨髓,利用percoll梯度离心法分离单个核细胞,进行体外原代和传代培养,并用不同代数细胞进行了细胞生长能力、膜表面抗原（CD105、CD90、CD45）及诱导分化能力的检测。结果显示分离培养的单个核细胞贴壁生长,形态呈成纤维细胞样及涡旋状克隆团;细胞传代至第17代生长状况仍然良好;用F 3代细胞进行膜表面抗原标记显示,CD90和CD105阳性表达率分别为（97.4±1.8）%和（99.6±0.9）%,而CD45阳性表达率仅为（1.8±0.55）%,证实这些细胞具有猪骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem Cells,MSCs）表面抗原;经地塞米松、维生素C和β-磷酸甘油等诱导F 3代细胞,21d后出现钙物质沉积细胞群,用茜素红和Von kossa染色呈阳性,证实这些细胞已分化形成成骨细胞;经地塞米松、IBMX、胰岛素及吲哚美辛等诱导F 3代细胞,21d后细胞质出现脂滴样结构,用油红O染色呈阳性,证实已分化形成成脂细胞;冷冻-解冻细胞的膜表面抗原及多能分化能力与未冻存细胞的检测结果基本一致。结果证实,从猪骨髓中分离培养及经传代扩增获得的贴壁细胞是纯化的MSCs...
【文章来源】：中国兽医学报. 2013,33(05)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
图２猪ＭＳＣｓ生长曲线
图５猪ＭＳＣｓ表面抗原阳性率９５％以上；解冻后的活细胞数分别为Ｆ３代（９０±２）％、Ｆ５代（８７±２）％、Ｆ１０代（７０±１）％、Ｆ１３代（６９±０．２５）％（图８）。解冻后细胞接种第５天，ＭＳＣｓ形成了小的细胞克隆团。解冻后的各代ＭＳＣｓ的表面抗原及分化能力均显示正常。３讨论本研究显示，从猪骨髓中分离的单个核细胞，经培养能够贴壁生长形成成纤维细胞样及涡旋状细胞克隆团；细胞传至第１７代生长状况仍然良好；经ＭＳＣｓ膜表面抗原ＣＤ１０５和ＣＤ９０标记，２种膜表面图６猪ＭＳＣｓ成骨细胞诱导分化及鉴定Ａ．Ｆ３代诱导第２１天ＭＳＣｓ的钙结节；Ｂ．Ｆ３代诱导第２１天茜素红染色；Ｃ．Ｆ３代诱导第１５天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色；Ｄ．Ｆ３代诱导第２１天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色图７猪ＭＳＣｓ成脂细胞诱导分化及鉴定Ａ．Ｆ３代成脂细胞诱导第１７天；Ｂ．Ｆ３代成脂细胞诱导第１７天油红Ｏ染色７９２中国兽医学报２０１３年５月第３３卷第５期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＭａｙ２０１３Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．５
图５猪ＭＳＣｓ表面抗原阳性率９５％以上；解冻后的活细胞数分别为Ｆ３代（９０±２）％、Ｆ５代（８７±２）％、Ｆ１０代（７０±１）％、Ｆ１３代（６９±０．２５）％（图８）。解冻后细胞接种第５天，ＭＳＣｓ形成了小的细胞克隆团。解冻后的各代ＭＳＣｓ的表面抗原及分化能力均显示正常。３讨论本研究显示，从猪骨髓中分离的单个核细胞，经培养能够贴壁生长形成成纤维细胞样及涡旋状细胞克隆团；细胞传至第１７代生长状况仍然良好；经ＭＳＣｓ膜表面抗原ＣＤ１０５和ＣＤ９０标记，２种膜表面图６猪ＭＳＣｓ成骨细胞诱导分化及鉴定Ａ．Ｆ３代诱导第２１天ＭＳＣｓ的钙结节；Ｂ．Ｆ３代诱导第２１天茜素红染色；Ｃ．Ｆ３代诱导第１５天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色；Ｄ．Ｆ３代诱导第２１天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色图７猪ＭＳＣｓ成脂细胞诱导分化及鉴定Ａ．Ｆ３代成脂细胞诱导第１７天；Ｂ．Ｆ３代成脂细胞诱导第１７天油红Ｏ染色７９２中国兽医学报２０１３年５月第３３卷第５期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＭａｙ２０１３Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．５
【参考文献】：
期刊论文
[1]梅山猪骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析[J]. 樊懿萱,张艳丽,杨岳,王子玉,宋辉,闫益波,钟部帅,孟立,聂海涛,葛婷,王锋. 南京农业大学学报. 2011(06)
[2]蒙古马骨髓间充质干细胞的分离培养及多向分化潜能的研究[J]. 张焱如,刘宗正,韦林盖,苏小虎,赵一萍,芒来. 畜牧兽医学报. 2011(10)
硕士论文
[1]山羊骨髓间充质干细胞体外分离与培养[D]. 华松.西北农林科技大学 2004
本文编号：3313287
【文章来源】：中国兽医学报. 2013,33(05)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
图２猪ＭＳＣｓ生长曲线
图５猪ＭＳＣｓ表面抗原阳性率９５％以上；解冻后的活细胞数分别为Ｆ３代（９０±２）％、Ｆ５代（８７±２）％、Ｆ１０代（７０±１）％、Ｆ１３代（６９±０．２５）％（图８）。解冻后细胞接种第５天，ＭＳＣｓ形成了小的细胞克隆团。解冻后的各代ＭＳＣｓ的表面抗原及分化能力均显示正常。３讨论本研究显示，从猪骨髓中分离的单个核细胞，经培养能够贴壁生长形成成纤维细胞样及涡旋状细胞克隆团；细胞传至第１７代生长状况仍然良好；经ＭＳＣｓ膜表面抗原ＣＤ１０５和ＣＤ９０标记，２种膜表面图６猪ＭＳＣｓ成骨细胞诱导分化及鉴定Ａ．Ｆ３代诱导第２１天ＭＳＣｓ的钙结节；Ｂ．Ｆ３代诱导第２１天茜素红染色；Ｃ．Ｆ３代诱导第１５天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色；Ｄ．Ｆ３代诱导第２１天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色图７猪ＭＳＣｓ成脂细胞诱导分化及鉴定Ａ．Ｆ３代成脂细胞诱导第１７天；Ｂ．Ｆ３代成脂细胞诱导第１７天油红Ｏ染色７９２中国兽医学报２０１３年５月第３３卷第５期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＭａｙ２０１３Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．５
图５猪ＭＳＣｓ表面抗原阳性率９５％以上；解冻后的活细胞数分别为Ｆ３代（９０±２）％、Ｆ５代（８７±２）％、Ｆ１０代（７０±１）％、Ｆ１３代（６９±０．２５）％（图８）。解冻后细胞接种第５天，ＭＳＣｓ形成了小的细胞克隆团。解冻后的各代ＭＳＣｓ的表面抗原及分化能力均显示正常。３讨论本研究显示，从猪骨髓中分离的单个核细胞，经培养能够贴壁生长形成成纤维细胞样及涡旋状细胞克隆团；细胞传至第１７代生长状况仍然良好；经ＭＳＣｓ膜表面抗原ＣＤ１０５和ＣＤ９０标记，２种膜表面图６猪ＭＳＣｓ成骨细胞诱导分化及鉴定Ａ．Ｆ３代诱导第２１天ＭＳＣｓ的钙结节；Ｂ．Ｆ３代诱导第２１天茜素红染色；Ｃ．Ｆ３代诱导第１５天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色；Ｄ．Ｆ３代诱导第２１天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色图７猪ＭＳＣｓ成脂细胞诱导分化及鉴定Ａ．Ｆ３代成脂细胞诱导第１７天；Ｂ．Ｆ３代成脂细胞诱导第１７天油红Ｏ染色７９２中国兽医学报２０１３年５月第３３卷第５期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＭａｙ２０１３Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．５
【参考文献】：
期刊论文
[1]梅山猪骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析[J]. 樊懿萱,张艳丽,杨岳,王子玉,宋辉,闫益波,钟部帅,孟立,聂海涛,葛婷,王锋. 南京农业大学学报. 2011(06)
[2]蒙古马骨髓间充质干细胞的分离培养及多向分化潜能的研究[J]. 张焱如,刘宗正,韦林盖,苏小虎,赵一萍,芒来. 畜牧兽医学报. 2011(10)
硕士论文
[1]山羊骨髓间充质干细胞体外分离与培养[D]. 华松.西北农林科技大学 2004
本文编号：3313287
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