IFT74对雄性小鼠精子发生及生育能力的影响

发布时间：2021-08-03 10:30

　　目的:探讨鞭毛内转运蛋白74（IFT74）对雄性小鼠精子发生和生育能力的影响,为更加全面地了解男性生殖功能障碍提供一定的科学线索。方法:将成年的Ift74^flox/flox雌性小鼠与Stra8-iCre雄性小鼠杂交,建立Ift74基因条件敲除小鼠,通过常规PCR分析小鼠的基因型,筛选出Stra8-iCre⁺/Ift74^flox/flox雄性小鼠作为实验组,Stra8-iCre^-雄性小鼠作为对照组,收集各组小鼠的心脏、脑、脾、肺、肝、肾、肌肉、睾丸及附睾等组织,采用蛋白印迹法检测在对照组小鼠各组织中IFT74蛋白的表达水平及睾丸组织中第一波精子发生各个阶段IFT74蛋白的表达水平;采用免疫荧光染色检测IFT74在实验组及对照组雄性小鼠睾丸组织生精细胞中的定位;采用HE染色检测睾丸和附睾等组织中精子发生各个阶段的形态学的变化,扫描电镜观察附睾中精子形态的变化,透射电镜观察小鼠睾丸组织超微结构的改变;蛋白印迹检测各组小鼠睾丸组织中IT20、IFT25、IFT27、IFT81、IFT88、IFT140、OD... 

【文章来源】：武汉科技大学湖北省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 材料
    2.1 主要试剂的配制
        2.1.1 组织固定液
        2.1.2 10%SDS溶液
        2.1.3 Lysis Buffer裂解液
        2.1.4 50×TAE电泳缓冲液
        2.1.5 RIPA Buffer裂解液
        2.1.6 1M Tris-Hcl溶液
        2.1.7 1.5M Tris-Hcl溶液
        2.1.8 10%AP溶液
        2.1.9 10×Running Buffer电泳缓冲液
        2.1.10 10×Transfer Buffer转膜缓冲液
        2.1.11 10×TBS溶液
        2.1.12 10×TBS-T溶液
    2.2 主要实验仪器
第3章 方法
    3.1 动物伦理证明
    3.2 Ift74基因条件敲除雄性小鼠的产生
    3.3 小鼠基因型分析
    3.4 检测IFT74蛋白在小鼠各组织中的表达水平
        3.4.1 小鼠组织蛋白提取
        3.4.2 小鼠组织蛋白浓度测定
        3.4.3 蛋白印迹（Western Blot，WB）检测小鼠组织中蛋白的表达水平
    3.5 小鼠生殖力和繁殖力评估
    3.6 小鼠附睾精子计数
    3.7 小鼠附睾精子活力分析
    3.8 小鼠生精细胞分离和免疫荧光染色
    3.9 小鼠睾丸和附睾组织包埋和HE染色
    3.10 扫描电子显微镜（SEM）分析小鼠附睾精子形态
    3.11 透射电子显微镜（TEM）检测小鼠睾丸组织的超微结构
    3.12 统计学分析
第4章 结果
    4.1 小鼠基因型结果分析
    4.2 IFT74蛋白在小鼠组织中的表达和定位
        4.2.1 IFT74蛋白在小鼠组织中的表达
        4.2.2 IFT74蛋白在小鼠生精细胞中的定位
    4.3 Ift74基因条件敲除对雄性小鼠生殖能力的影响
        4.3.1 Ift74基因条件敲除小鼠模型中IFT74蛋白的表达水平
        4.3.2 Ift74基因条件敲除对雄性小鼠生育能力的影响
    4.4 Ift74基因条件敲除雄性小鼠精子形态和精子发生过程异常
        4.4.1 Ift74基因条件敲除雄性小鼠附睾精子数量和活力显著降低
        4.4.2 Ift74基因条件敲除雄性小鼠附睾精子形态异常
        4.4.3 Ift74基因条件敲除雄性小鼠精子发生过程异常
        4.4.4 Ift74基因条件敲除雄性小鼠睾丸超微结构异常
    4.5 IFT74对睾丸组织中其他IFT蛋白及鞭毛相关蛋白表达水平的影响
第5章 讨论
第6章 结语与展望
参考文献
综述
    参考文献
致谢
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目


【参考文献】：
期刊论文
[1]精子纤维鞘发育不良的临床和病因学研究现状[J]. 马林伟,徐红涛,戴小丽,张清,杨慎敏.  临床医药文献电子杂志. 2017(69)
[2]人类受精相关精子功能蛋白质研究进展[J]. 张蔚,李建远,谷翊群.  生殖医学杂志. 2015(12)
[3]精子纤维鞘发育不良的形态学和遗传学初步研究（附3例报道）[J]. 王家雄,杨慎敏,马林伟,程洪波,李海波.  中国男科学杂志. 2015 (03)
[4]精子纤维鞘发育不良的研究进展[J]. 杨慎敏,李铮,李红.  中华男科学杂志. 2014(11)
[5]精子发生障碍的遗传学研究进展[J]. 曹云霞,高明.  国际生殖健康/计划生育杂志. 2014(03)
[6]不孕症患者的心理因素分析及其心理干预的研究进展[J]. 朱彤宇,李军.  实用医药杂志. 2014(05)
[7]男性不育的病因及治疗新进展[J]. 郭继梅,吕玲,宫玉环.  医学综述. 2013(22)
[8]淮安地区4598例不育男性精液质量分析[J]. 左阳花,冯播,薛惠英,范雪芹.  检验医学与临床. 2012(02)
[9]683例男性不育患者精液常规结果分析[J]. 侯哲,孔欣,张娟辉,罗娅军,符红英,陈远宏.  广东医学. 2011(09)
[10]近25年中国正常男性精液质量的变化趋势分析[J]. 黄莉萍,李亚斐,熊鸿燕,曹佳.  生殖与避孕. 2011(02)

硕士论文
[1]不明原因不育症患者精子超微结构的研究[D]. 杨文颖.河北大学 2015



本文编号：3319463