HNF1α翻译后修饰的分子机制及生物学意义

发布时间：2021-08-03 12:05

　　肝细胞核因子1α（HNF1α）作为肝脏中最重要的转录因子之一,以复合体形式参与调控多种肝脏特异基因的表达,并涉及蛋白质合成、物质代谢、损伤修复等多个生物学过程。同时HNF1α也是维持胰腺功能的重要分子,调控胰岛素、葡萄糖转运蛋白等分子的表达。在肠和肾中,HNF1α也发挥着调控发育和物质吸收的重要作用。在糖代谢中,HNF1α更是扮演着―中心分子‖的作用。HNF1α的突变会引发Ⅲ型青少年发病的成人糖尿病,也就是临床上所说的MODY3,这是一种由单基因突变所导致的负显性突变疾病,临床上表现为25岁前发病,胰岛素分泌不足,血糖严重升高等症状,由于患者HNF1α基因突变的晚期糖尿病并发症的频率高,早期诊断与适当的治疗可以减少或延缓糖尿病并发症的发生。因此研究HNF1α调控机制和功能有着重要的意义。在研究中我们通过IP-MS发现,HNF1α是一个磷酸化蛋白质。并且我们还发现了一个新的磷酸化位点,Ser249位。接下来我们通过体外磷酸化实验发现,无论内源或者外源ATM蛋白激酶都可以磷酸化HNF1α的Ser249位点。当辐射处理引发DNA损伤活化ATM激酶活性时,HNF1α的磷酸化水平显著提高。我们发... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

LC-MS/MS鉴定HNF1αSer247和Ser249两个氨基酸残基

AT5BIVA 细胞系（ATM-/-）进行体外磷酸化实验。在 AT5BIVA 细胞中分别转染Flag-ATM 或对照载体（pCMV-FLAG），转染 24 小时后用 10Gyγ 射线照射处理，照射后 2 小时提取细胞总蛋白进行体外磷酸化实验。结果如图 2B 所示，在回转Flag-ATM 的实验组中检测到了 HNF1α 的磷酸化信号，而在转染对照载体的实验组中，没有检测到 HNF1α 的磷酸化信号。

图 2C：在 ATM-/-细胞中转染 Flag-ATM，用60Co 进行 10Gy 照射，照射后 2h 收集细胞，裂解细胞并通过免疫共沉淀的方法纯化 ATM 激酶，分别以体外诱导表达的 GST-HNF1α、HNF1α-S247A（92~283）和HNF1α-S249A（92~283）作为体外磷酸化实验的底物。共孵育复合物进行放射自显影，并分别用 ATM 抗体和 ATM（s1981）抗体对 ATM 激酶免疫共沉淀产物进行免疫印迹分析。我们使用 ATM 的酶活性特异抑制剂 KU55933 处理 HepG2 细胞，2 小时后


本文编号：3319589