抗GM-CSF纳米抗体的筛选与鉴定

发布时间：2021-08-03 15:02

　　目的:制备抗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）纳米抗体,并测定其亲和力。方法:分离提取GM-CSF免疫后羊驼外周血淋巴细胞总RNA,PCR扩增得到纳米抗体基因片段,与载体pHEN1重组后克隆至大肠杆菌TG1以构建初始文库,经拯救构建得到噬菌体展示纳米抗体文库,并对其进行生物淘选;通过大肠杆菌BL21（DE3）原核表达阳性纳米抗体克隆,并测定其亲和力。结果:构建了多样性良好且库容量为1.37×10⁹cfu的纳米抗体初始文库,3轮淘选后共筛选得到5株氨基酸序列差异性较大的纳米抗体,并对其中一株纳米抗体G1进行表达纯化,SDS-PAGE分析表明纳米抗体G1纯度较高,且有较高的亲和力(K_D=2.95×10^-8mol/L)。结论:制备了高亲和力的抗GM-CSF纳米抗体,可应用于相关炎症抗体药物研制和疾病监测等方面。 

【文章来源】：生物技术通讯. 2020,31(02)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

初始文库的氨基酸序列比对结果

纳米抗体的分子大小仅为传统单克隆抗体的1/10，具有独特的优势，如体积小、稳定性高，能够穿过血脑屏障并持续稳定地发挥作用；纳米抗体还可实现在原核生物中大量表达，可以大大降低生产成本，且免疫原性低[19]，在细胞中容易被清除，从而保证对人体无害。更重要的，纳米抗体有着更长的抗原结合互补区CDR1和CDR3，具有比传统单克隆抗体更强的抗原结合能力，并且依据纳米抗体易改造的特点，还可通过点突变等基因工程技术进一步提高纳米抗体的亲和力[20]。而单克隆抗体由于组织渗透性差，体内不易被清除且制备成本高，从而限制了其临床应用。图6 纳米抗体G1的氨基酸序列

纳米抗体G1的氨基酸序列

【参考文献】：
期刊论文
[1]抗脂多糖纳米抗体的筛选及其五聚体的制备[J]. 武文,李胜华,张伟京,王炳奇.  生物技术通讯. 2013(05)
[2]驼源天然单域重链抗体库的构建与鉴定[J]. 涂追,许杨,刘夏,何庆华,陶勇.  中国生物工程杂志. 2011(04)



本文编号：3319832