多聚鸟氨酸逆转纤连蛋白对少突胶质细胞分化的抑制作用

发布时间：2021-08-05 21:36

　　研究背景:少突胶质细胞是中枢神经系统成髓鞘细胞,其生物膜包绕轴突形成髓鞘,髓鞘的形成大大加快神经信号在轴突上的传导,维持正常的神经功能。面临床上一些中枢神经系统的疾病往往累及到髓鞘,导致髓鞘的脱落和丧失,造成神经传导的障碍和丧失,最终导致神经元的死亡。目前脱髓鞘疾病仍无有效的治疗方案。大量的研究发现脱髓鞘疾病中细胞外微环境发生改变,不利于髓鞘的再生,其中包括纤连蛋白（Fibronectin,FN）的增加、聚集。纤连蛋白影响少突胶质细胞发育,而目前对纤连蛋白在少突胶质细胞再生过程中的作用仍存在一些争议,我们设计了一系列实验确定纤连蛋白在少突胶质细胞发育和再生过程中的作用,并寻找合适的新方法来促进髓鞘发育和损伤再生。研究目的:本研究确定纤连蛋白对少突胶质细胞发育的作用,及其影响的信号通路;在此基础上,探讨促进少突胶质细胞分化和髓鞘再生的新型方法,为脱髓鞘疾病治疗开辟新的途径。研究方法:（1）少突胶质细胞前体细胞（OPCs）原代细胞培养,经过两次差速贴壁方法进行纯化,获得较高纯度的OPCs。（2）利用免疫荧光技术在OPCs增殖过程中检测NG2、Olig2、Ki67的表达情况,分析不同基质处理... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２．少突胶质细胞分化不同程度分形维数Ｄ值??

??性结构，整个细胞呈现实质膜性结构。（图３）??Ｎｏｎ－ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ?Ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ?Ｍｙｅｌｉｎ?ｓｈｅｅｔｓ??图３．少突胶质细胞分化形成不同的膜性结构??（４）?ＭＢＰ阳性细胞定量分析，随机选取６个区域，三次独立的实验，应用??Ｉｍａｇｅ?Ｊ２Ｘ软件进行总的焚光强度（Ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ?Ｔｏｔａｌ?Ｃｅｌｌ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，?ＣＴＣＦ）和平??均焚光强度（Ｍｅａｎ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，ＭＦＩ）计算；然后，随机选取至少１０个??细胞，应用Ｉｍａｇｅ?Ｊ２Ｘ软件圈出整个细胞轮廓进行面积计算。??２．?５荧光定量ＰＣＲ??２．５．１细胞ＲＮＡ提取??（１）

本实验混合细胞培养阶段用ＰＤＬ对培养皿进行包被，由于星形胶质??细胞贴壁粘附较快，ＯＰＣｓ贴壁粘附相对较慢，以此可对ＯＰＣｓ进行一次或多次??纯化。纯化后应用免疫荧光对细胞染色，检测ＯＰＣｓ的纯度（图１．１）。经过第一??次纯化后，ＯＰＣｓ的细胞纯度（０１ｉｇ２＋／ＤＡＰｒ）为８９．９６±０．８７％，仍有较多的星形??胶质细胞（ＧＦＡＰ＋细胞）；经过第二次纯化后，ＯＰＣｓ的纯度明显提高，细胞纯??度达到９７．３０±０．１１％?（表１．１），避免了其它种类细胞的干扰，完全满足实验中??对ＯＰＣｓ纯度的要求。本课题试验中所用到的ＯＰＣｓ均经过两次纯化后的细胞。??０１ｉｇ２?ＧＦＡＰ／ＤＡＰＩ?ＯＨｇ２／ＧＦＡＰ／ＤＡＰＩ??１１１??图１．１差速贴壁法进行细胞纯化后ＯＰＣｓ纯度。免疫焚光染色，０１ｉｇ２?（绿色，标记ＯＰＣｓ）、??ＧＦＡＰ?（红色，标记星形胶质细胞）、ＤＡＰＩ?（蓝色，标记细胞核）。比例尺：１０（Ｕｕｉｉ??表１．１两次纯化ＯＰＣｓ细胞数及纯度。（Ｘ?土ＳＥＭ，?ｎ＝６）???０丨ｉｇ２４细胞数?ＤＡＰＩ＋细胞数?０丨ｉｇ２７ＤＡＰＩ?＋?（％）??—次纯化?２０９．?６７±１１．１４?２３８．?６７±１４．?８９?８９．?９６±０．?８７??二次纯化?１７９．?００±１３．?５８?１８４．?００±１４．?１５?９


本文编号：3324499