日本血吸虫SjGrpE蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备
发布时间：2021-08-05 09:46
目的分析日本血吸虫核苷酸交换因子（SjGrpE）蛋白生物学特性,表达与纯化重组SjGrpE蛋白并测定其免疫原性。方法采用生物信息学方法预测SjGrpE蛋白的氨基酸组成、分子量、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、定位、磷酸化位点、泛素化位点、糖基化位点、二级和三级结构及B细胞表位。以日本血吸虫cDNA为模板,PCR扩增SjGrpE基因,将其双酶切后连接到pET28a载体得到重组质粒pET28a-SjGrpE。将pET28a-SjGrpE转化大肠埃希菌BL21,用IPTG诱导目的蛋白表达,并用镍离子亲和层析法纯化蛋白。将重组SjGrpE蛋白免疫小鼠,分离血清并鉴定获得的抗多克隆抗体。结果SjGrpE蛋白分子量约为24.3 kDa,是一种亲水性蛋白,无跨膜区、无信号肽,定位在线粒体;该蛋白含有18个磷酸化位点和2个泛素化位点,无糖基化位点,含有5个B细胞表位。SjGrpE基因全长为660 bp,成功构建重组质粒pET28a-SjGrpE并纯化获得重组SjGrpE蛋白。重组SjGrpE蛋白能够刺激小鼠分泌高滴度抗体。结论成功制备重组SjGrpE蛋白,该蛋白具有良好免疫原性,为后续研究其作为日本血吸虫...
【文章来源】：中国血吸虫病防治杂志. 2020,32(04)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
SjGrpE蛋白磷酸化和泛素化位点预测FigFig.2PredictionofphosphorylationandubiquitinationsitesoftheSjGrpEprotein注：A磷酸化位点；B泛素化位点Note:APhosphorylationsite;BUbiquitinationsite
中国血吸虫病防治杂志2020年第32卷第4期ChinJSchistoControl2020，Vol.32，No.4注：A磷酸化位点；B泛素化位点Note:APhosphorylationsite;BUbiquitinationsite图2SjGrpE蛋白磷酸化和泛素化位点预测FigFig.2PredictionofphosphorylationandubiquitinationsitesoftheSjGrpEprotein注：A跨膜区；B信号肽Note:ATransmembraneregion;BSignalpeptide图3SjGrpE蛋白跨膜区和信号肽预测FigFig.3PredictionofthetransmembraneregionandsignalpeptideoftheSjGrpEprotein注：A二级结构；B三级结构Note:ASecondarystructure;BTertiarystructure图4SjGrpE蛋白二级结构和三级结构预测FigFig.4PredictionofthesecondaryandtertiarystructuresoftheSjGrpEprotein1.6B细胞表位利用BepiPred2.0工具预测SjGrpE蛋白B细胞表位，发现SjGrpE蛋白1~38、100~119、152~163、177~182位和191~201位氨基酸阈值高于设定值（图5），故认为这些多肽片段为B细胞表位，其具体氨基酸序列见表1。图5SjGrpE蛋白B细胞表位预测FigFig.5PredictionofBcellepitopesofSjGrpEprotein表1SjGrpE蛋白B细胞表位氨基酸序列Table1AminoacidsequenceofBcellepitopesoftheSjGrpEprotein编号Number12345开始Start4100152177191结束End34119163182201肽段序列PeptidesequenceGVATIFPRCVHRCSARLIHFRFPVVSGLCSGFGIQSFCKDLLEVADVLTTAKVFSHYNLVRISAIFQAPTVAVVTKIGYQ··358
饕??α螺旋和无规卷曲组成，其中99个（45.62%）氨基酸残基是α螺旋、97个（44.70%）属于无规则卷曲、17个（7.83%）是β片层，不含β转角（图4A）。使用同源建模方法，以SWISSMODEL蛋白质结构数据库中嗜热栖热菌（Thermusthermophilus）HB8株同源序列（PDB编号：3a6m.1）为SjGrpE蛋白模板进行预测，发现SjGrpE三级结构是由两个单体构成的二聚体，N端由大量α螺旋构成、C端由无规则卷曲和β片层构成（图4B）。注：A氨基酸组成；B亲水性Note:AAminoacidcomposition;Bhydrophilicity图1SjGrpE蛋白的氨基酸组成及亲水性预测Figig.1PredictionofaminoacidcompositionandhydrophilicityoftheSjGrpEprotein··357
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国血吸虫病消除工作进展及面临的挑战[J]. 许静,吕山,曹淳力,李石柱,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(06)
[2]鸡毒支原体热休克蛋白GrpE粘附特性的鉴定[J]. 周长平,陈莹,李媛,高利萍,王显兵,王莉莉,于艳超,辛九庆. 中国预防兽医学报. 2017(01)
[3]热休克蛋白70的功能及其在寄生虫生长发育中的作用[J]. 何思杰,吕志跃,吴忠道. 热带医学杂志. 2010(05)
[4]热休克蛋白与寄生虫感染的关系[J]. 王强,李勉,张龙现. 中国畜牧兽医. 2009(06)
本文编号：3323533
【文章来源】：中国血吸虫病防治杂志. 2020,32(04)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
SjGrpE蛋白磷酸化和泛素化位点预测FigFig.2PredictionofphosphorylationandubiquitinationsitesoftheSjGrpEprotein注：A磷酸化位点；B泛素化位点Note:APhosphorylationsite;BUbiquitinationsite
中国血吸虫病防治杂志2020年第32卷第4期ChinJSchistoControl2020，Vol.32，No.4注：A磷酸化位点；B泛素化位点Note:APhosphorylationsite;BUbiquitinationsite图2SjGrpE蛋白磷酸化和泛素化位点预测FigFig.2PredictionofphosphorylationandubiquitinationsitesoftheSjGrpEprotein注：A跨膜区；B信号肽Note:ATransmembraneregion;BSignalpeptide图3SjGrpE蛋白跨膜区和信号肽预测FigFig.3PredictionofthetransmembraneregionandsignalpeptideoftheSjGrpEprotein注：A二级结构；B三级结构Note:ASecondarystructure;BTertiarystructure图4SjGrpE蛋白二级结构和三级结构预测FigFig.4PredictionofthesecondaryandtertiarystructuresoftheSjGrpEprotein1.6B细胞表位利用BepiPred2.0工具预测SjGrpE蛋白B细胞表位，发现SjGrpE蛋白1~38、100~119、152~163、177~182位和191~201位氨基酸阈值高于设定值（图5），故认为这些多肽片段为B细胞表位，其具体氨基酸序列见表1。图5SjGrpE蛋白B细胞表位预测FigFig.5PredictionofBcellepitopesofSjGrpEprotein表1SjGrpE蛋白B细胞表位氨基酸序列Table1AminoacidsequenceofBcellepitopesoftheSjGrpEprotein编号Number12345开始Start4100152177191结束End34119163182201肽段序列PeptidesequenceGVATIFPRCVHRCSARLIHFRFPVVSGLCSGFGIQSFCKDLLEVADVLTTAKVFSHYNLVRISAIFQAPTVAVVTKIGYQ··358
饕??α螺旋和无规卷曲组成，其中99个（45.62%）氨基酸残基是α螺旋、97个（44.70%）属于无规则卷曲、17个（7.83%）是β片层，不含β转角（图4A）。使用同源建模方法，以SWISSMODEL蛋白质结构数据库中嗜热栖热菌（Thermusthermophilus）HB8株同源序列（PDB编号：3a6m.1）为SjGrpE蛋白模板进行预测，发现SjGrpE三级结构是由两个单体构成的二聚体，N端由大量α螺旋构成、C端由无规则卷曲和β片层构成（图4B）。注：A氨基酸组成；B亲水性Note:AAminoacidcomposition;Bhydrophilicity图1SjGrpE蛋白的氨基酸组成及亲水性预测Figig.1PredictionofaminoacidcompositionandhydrophilicityoftheSjGrpEprotein··357
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国血吸虫病消除工作进展及面临的挑战[J]. 许静,吕山,曹淳力,李石柱,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(06)
[2]鸡毒支原体热休克蛋白GrpE粘附特性的鉴定[J]. 周长平,陈莹,李媛,高利萍,王显兵,王莉莉,于艳超,辛九庆. 中国预防兽医学报. 2017(01)
[3]热休克蛋白70的功能及其在寄生虫生长发育中的作用[J]. 何思杰,吕志跃,吴忠道. 热带医学杂志. 2010(05)
[4]热休克蛋白与寄生虫感染的关系[J]. 王强,李勉,张龙现. 中国畜牧兽医. 2009(06)
本文编号：3323533
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