全反式维甲酸通过Sp1/Sp3位点调节HEK-293细胞中CD2AP基因的表达
发布时间：2021-08-12 05:00
目的研究全反式维甲酸（ATRA）对人胚胎肾HEK-293细胞中CD2相关蛋白（CD2AP）基因表达的影响。方法 ATRA作用HEK-293细胞后,采用RT-PCR和Western blot分别检测CD2AP mRNA及其蛋白的表达。将构建的不同Sp1/Sp3位点的定点突变、巢式缺失突变的CD2AP启动子质粒转染HEK-293细胞,检测报告质粒的荧光素酶活性。结果 ATRA明显上调HEK-293细胞中CD2AP mRNA和蛋白水平（P<0.05）。缺失突变及点突变研究显示,Sp1/Sp3-A、C位点在介导ATRA上调CD2AP过程中发挥重要作用。结论 ATRA通过Sp1/Sp3结合位点诱导HEK-293细胞中CD2AP的表达;ATRA对CD2AP基因缺陷肾病患者可能有治疗作用。
【文章来源】：江苏医药. 2013,39(09)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
ａＰ＜０．０５图１ＡＴＲＡ对ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ表达的作用与０ｈ
ＴＲＡ培养４８ｈ后收集细胞，用化学发光检测仪测定报告质粒的荧光素酶活性，以ｐＲＬ－ＴＫ的发光值标准化数据。三、统计学处理应用ＳＰＳＳ１３．０软件进行统计学分析，原始数据符合正态分布的用均数±标准差（珔ｘ±ｓ）表示；均数两两比较采用ｔ检验；Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果一、ＡＴＲＡ上调ＨＥＫ－２９３细胞的ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ水平加入ＡＴＲＡ后，ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ水平明显增加（Ｐ＜０．０５）（图１）。与０ｈ比较，ａＰ＜０．０５图１ＡＴＲＡ对ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ表达的作用二、ＡＴＲＡ上调ＨＥＫ－２９３细胞的ＣＤ２ＡＰ蛋白水平经过ＡＴＲＡ处理４８ｈ后，ＣＤ２ＡＰ蛋白表达明显增加（Ｐ＜０．０５）（图２）。与０μＭ比较，ａＰ＜０．０５图２ＡＴＲＡ对ＣＤ２ＡＰ蛋白表达的作用三、ＣＤ２ＡＰ启动子区巢式缺失突变所致的活性变化ＡＴＲＡ上调含Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ位点的０．６ｋｂＣＤ２ＡＰ启动子活性（Ｐ＜０．０５），部分上调了含Ｓｐ１／·１０００·江苏医药２０１３年５月第３９卷第９期ＪｉａｎｇｓｕＭｅｄＪ，Ｍａｙ２０１３，Ｖｏｌ３９，Ｎｏ．９
Ｓｐ３－Ｃ、Ｄ位点的０．５ｋｂＣＤ２ＡＰ启动子活性（Ｐ＜０．０５），但不能调高仅含Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ｄ位点的０．３ｋｂＣＤ２ＡＰ启动子活性（Ｐ＞０．０５），进一步缺失突变Ｓｐ１／Ｓｐ３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ位点的０．２ｋｂ、０．１ｋｂ的ＣＤ２ＡＰ启动子无明显活性（Ｐ＞０．０５），表明Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｂ、Ｃ位点可能在介导ＡＴＲＡ上调ＣＤ２ＡＰ过程中发挥重要作用，Ｄ位点不起作用（图３）。图３ＡＴＲＡ对含不同Ｓｐ位点的系列缺失ＣＤ２ＡＰ启动子活性的作用四、ＣＤ２ＡＰ启动子区Ｓｐ位点突变所致的活性变化研究显示，突变Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｃ位点后，启动子活性有明显下降（Ｐ＜０．０５），而突变Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ｂ、Ｄ位点后，启动子活性下降不明显（Ｐ＞０．０５），表明Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｃ位点在介导ＡＴＲＡ的这种调节中起作用，而Ｂ、Ｄ位点不起作用（图４）。图４ＡＴＲＡ对含不同Ｓｐ１／Ｓｐ３位点的点突变ＣＤ２ＡＰ启动子活性的作用讨论ＣＤ２相关蛋白（ＣＤ２ＡＰ）是Ｔ淋巴细胞ＣＤ２的接头蛋白，是肾小球硬化易感的决定因素之一。在研究ＣＤ２ＡＰ敲除小鼠时，除出现预期的小鼠免疫功能下降外，还发现小鼠产生类似人的局灶性节段性肾小球硬化（ＦＳＧＳ）的病变、先天性肾病的临床表现［５］，证实了ＣＤ２ＡＰ异常在肾脏疾病的发生发展中起着重要的作用。维甲酸在生物个体发育及维持正常生理状态中有重要作用，有介导细胞分化、增殖、凋亡及调节免疫等功能［６－９］
本文编号：3337634
【文章来源】：江苏医药. 2013,39(09)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
ａＰ＜０．０５图１ＡＴＲＡ对ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ表达的作用与０ｈ
ＴＲＡ培养４８ｈ后收集细胞，用化学发光检测仪测定报告质粒的荧光素酶活性，以ｐＲＬ－ＴＫ的发光值标准化数据。三、统计学处理应用ＳＰＳＳ１３．０软件进行统计学分析，原始数据符合正态分布的用均数±标准差（珔ｘ±ｓ）表示；均数两两比较采用ｔ检验；Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果一、ＡＴＲＡ上调ＨＥＫ－２９３细胞的ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ水平加入ＡＴＲＡ后，ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ水平明显增加（Ｐ＜０．０５）（图１）。与０ｈ比较，ａＰ＜０．０５图１ＡＴＲＡ对ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ表达的作用二、ＡＴＲＡ上调ＨＥＫ－２９３细胞的ＣＤ２ＡＰ蛋白水平经过ＡＴＲＡ处理４８ｈ后，ＣＤ２ＡＰ蛋白表达明显增加（Ｐ＜０．０５）（图２）。与０μＭ比较，ａＰ＜０．０５图２ＡＴＲＡ对ＣＤ２ＡＰ蛋白表达的作用三、ＣＤ２ＡＰ启动子区巢式缺失突变所致的活性变化ＡＴＲＡ上调含Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ位点的０．６ｋｂＣＤ２ＡＰ启动子活性（Ｐ＜０．０５），部分上调了含Ｓｐ１／·１０００·江苏医药２０１３年５月第３９卷第９期ＪｉａｎｇｓｕＭｅｄＪ，Ｍａｙ２０１３，Ｖｏｌ３９，Ｎｏ．９
Ｓｐ３－Ｃ、Ｄ位点的０．５ｋｂＣＤ２ＡＰ启动子活性（Ｐ＜０．０５），但不能调高仅含Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ｄ位点的０．３ｋｂＣＤ２ＡＰ启动子活性（Ｐ＞０．０５），进一步缺失突变Ｓｐ１／Ｓｐ３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ位点的０．２ｋｂ、０．１ｋｂ的ＣＤ２ＡＰ启动子无明显活性（Ｐ＞０．０５），表明Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｂ、Ｃ位点可能在介导ＡＴＲＡ上调ＣＤ２ＡＰ过程中发挥重要作用，Ｄ位点不起作用（图３）。图３ＡＴＲＡ对含不同Ｓｐ位点的系列缺失ＣＤ２ＡＰ启动子活性的作用四、ＣＤ２ＡＰ启动子区Ｓｐ位点突变所致的活性变化研究显示，突变Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｃ位点后，启动子活性有明显下降（Ｐ＜０．０５），而突变Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ｂ、Ｄ位点后，启动子活性下降不明显（Ｐ＞０．０５），表明Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｃ位点在介导ＡＴＲＡ的这种调节中起作用，而Ｂ、Ｄ位点不起作用（图４）。图４ＡＴＲＡ对含不同Ｓｐ１／Ｓｐ３位点的点突变ＣＤ２ＡＰ启动子活性的作用讨论ＣＤ２相关蛋白（ＣＤ２ＡＰ）是Ｔ淋巴细胞ＣＤ２的接头蛋白，是肾小球硬化易感的决定因素之一。在研究ＣＤ２ＡＰ敲除小鼠时，除出现预期的小鼠免疫功能下降外，还发现小鼠产生类似人的局灶性节段性肾小球硬化（ＦＳＧＳ）的病变、先天性肾病的临床表现［５］，证实了ＣＤ２ＡＰ异常在肾脏疾病的发生发展中起着重要的作用。维甲酸在生物个体发育及维持正常生理状态中有重要作用，有介导细胞分化、增殖、凋亡及调节免疫等功能［６－９］
本文编号：3337634
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