干细胞上YAP1条件性敲除影响前列腺生长发育

发布时间：2021-08-12 05:52

　　目的:利用Crisper cas9技术及转基因小鼠模型,获得干细胞上YAP1敲除条件转基因小鼠。通过对YAP1敲除转基因小鼠发育成熟时前列腺的研究,探讨YAP1通过调控正常前列腺干细胞维持干性及分化进而影响前列腺正常生长发育的分子机制。一方面,进一步了解正常前列腺生长发育分子机制,可能在未来为前列腺癌的防治提供新的方向;另一方面,进一步探讨YAP1蛋白的分子功能,为将来YAP1可能作为一个肿瘤防治的新靶点提供证据。方法:实验主要为体内实验。我们选用CD133作为胚胎时期干细胞的标志物。CD133作为干细胞标记物,在胚胎及成人时期中枢神经系统、肾、肠、泌尿生殖系统包括前列腺等都有表达。我们使用Cre-loxp系统及Crisper cas9技术获得干细胞上YAP1敲除转基因小鼠。通过杂交得到基因型为YAP1fl/fl,CD133-Cre ERT2的转基因小鼠,进而达到时间及组织特异性的YAP1敲除效果。我们在胚胎第17天（小鼠前列腺发育开始于妊娠17.5天）给予与雄性基因型为YAP1fl/fl杂交的基因型为YAP1fl/fl,CD133-Cre ERT2的妊娠母鼠Tamoxifen,即在小... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

转基因小鼠模型杂交方案

图 1.2：转基因小鼠模型杂交方案二根据上述转基因小鼠杂交方案，我们可以得到实验组及对照组小鼠的基因型分组，如下图所示：分组 基因型实验组 YAPfl/fl，Cre对照组 YAP+/+，CreYAPfl/fl1.1.4.3 实验方案经过对小鼠前列腺正常发生发育过程的了解及 Cre-loxp 系统工作原理的认识，我们选取了特异性时间点即小鼠前列腺发生的时间点（小鼠胚胎 17 天）为他莫西芬给药时间点，小鼠前列腺生长发育基本成熟时间点（小鼠 6周龄）为小鼠牺牲点，实验方案如下图：

天津医科大学硕士学位论文1.2 结果1.2.1实验组及对照组小鼠的获得1.2.1.1初代 F1小鼠的确定及 F2 代小鼠的获得将购得的初代小鼠（YAPfl/fl及 CD133-Cre 小鼠）预先在动物房中饲养 10天左右以熟悉环境，然后合笼饲养以获得 F2 代（YAPfl/+，CD133-Cre）。作为种鼠的 F1 代小鼠基因型检测结果如下图所示：


本文编号：3337719