动物源性生物材料免疫原性检测与评价技术研究

发布时间：2021-08-22 03:59

　　[目的]α-Gal抗原是动物组织、器官引起超急性免疫排斥反应的主要靶抗原,动物源性生物材料经脱抗原工艺处理后仍然残留α-Gal抗原。本研究旨在建立动物源性生物材料α-Gal抗原特异性的免疫原性检测与评价技术。[方法]1、动物源性生物材料Gal抗原含量检测标准化方法的建立与应用采用人工合成的Gal-BSA结合Gal抗原阴性生物材料裂解上清液作为标准曲线样品,以Gal抗原阳性生物材料（猪肝脏来源）与Gal抗原阴性生物材料（人胎盘组织来源）监测实验体系的敏感性和特异性,利用Gal抗原特异性抗体（M86）,建立酶联免疫抑制方法。采用建立的标准方法定量检测脱细胞基质类生物材料（如牛源生物骨修复材料、牛心包来源组织修复补片、脱细胞猪结膜）的Gal抗原残留量;同时考察以猪肝脏为原料制备的Gal抗原阳性生物材料参考品的均一性及稳定性;以协作标定的方式对Gal抗原阳性生物材料参考品的Gal抗原含量进行赋值。2、GGTA1基因敲除小鼠的制备、免疫学特性及应用研究利用细菌染色体同源重组技术制备GGTA1基因敲除（KO）小鼠。采用southern bolt鉴定小鼠基因型的变化。取GGTA1 KO小鼠的主要脏器... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１标准品Ｇａｌ－ＢＳＡ的Ｍ８６结合抑制曲线

总ＩｇＧ、ＩｇＭ检测??ＩｇＧ：根据小鼠ＩｇＧ检测试剂盒操作，血清稀释选择５０万ＩｇＭ：根据小鼠ＩｇＭ检测试剂盒操作，血清稀释选择１５万Ｇａ丨ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ检测??制小鼠血清系列稀释液，稀释比例为１：２５，１：１００，?１：４００，６００，１：５１２００，具体实验方法见第二部分。??析???２０．０软件，所得计量数据以（ｉ±Ｓ）表示，多组间行单因异有显著性意义。??Ｂｌｏｔ??Ｈ＊?Ｈ??

图２?ＷＴ小鼠与ＧＧＴＡｌ?ＫＯ小鼠的ｍＲＮＡ表达水平??比，ＧＧＴＡ１?ＫＯ小鼠的ＧＧＴＡ１?ｍＲＮＡ未见表达。??器Ｇａｌ抗原含量表达??。??表１．小鼠脏器Ｇａｌ抗原表达景检测结果??（ｎｘｌＯ１１?Ｇａｌ脾脏?心脏?肝脏?肾脏２４５．０８?±４８．５３?９３．０５±７．１７?２４．９１±４．８８?５８．５６±１７．８６鼠?０．８８?士０．１８?０．７４±０．３９?０．２５±０．１５?０．２０±０．０４?９９．６４?９９．２０?９８．９８?９９．６５相比，ＧＧＴＡ１?ＫＯ小鼠的主要脏器Ｇａｌ抗原含量降低率达９ＴＡ１是调控合成Ｇａｌ抗原的主要基因，ＧＧＴＡ１缺失可造成Ｇ失。??血红细胞刺激的敏感性评价??


本文编号：3356955